1. 50分急求 如何用光敏生物素標記質粒
生物素化質粒ds-DNA：將含質粒pBR332的大腸桿菌在含氨苄青黴素的LB培養基中擴增，取純培養物用MagicTM DNA純化系統，按Promega公司所附操作說明書提取質粒ds-DNA。取純化的不含單鏈DNA的大腸桿菌質粒ds-DNA直接與長臂光敏生物素混合，用游標記燈進行光照標記，以制備生物素化質粒ds-DNA。可參考以下步驟：在一滅菌EP管中加待標記DNA 5ug／10uL，在暗室中加入5ug／uL光敏生物素，充分混勻，置冰浴中。
在特製光源下10cm處照射20min。加入100mmol／LTris-HCl，pH9．0(含0．1mmol／LEDTA)10uL，混勻。再加入等體積仲丁醇，混勻。離心lmin(10 000r／rain)，吸去上層仲丁醇，棄去。再加入仲丁醇25uL，重復提取游離的光敏生物素。吸去上層無色仲丁醇後，加入5uL3mol／L醋酸鈉，充分混勻，加入冷無水酒精100gL充分混勻，沉澱標記的DNA，置-20℃過夜(或-70℃l5min)，15 000r／min離心20min，沉澱物再用70％乙醇洗1次，離心，抽干，溶於0．1mmol／LEDTA或TK中，測定探針濃度，分裝，保存於-20℃。
2. 配置MD培養基時，葡萄糖和瓊脂粉一起高壓滅菌，之後加入YNB和生物素，倒板後為何成半凝固狀態
如果凝固不好，除了瓊脂量不夠，那隻能是瓊脂質量的問題了，換種試試看。
3. 豆奶怎樣殺菌
核心提示：豆奶的熱殺菌是必須進行的；但為了保證豆奶的風味質量，殺菌溫度和時間必須選擇好。但本文建議的方法有待商榷，轉發本文，僅供參考。
眾所周知，無論什麼食品必須保證無病原微生物和其它毒害物質，這是最主要的，在滿足這一要求的前提下，再盡量考慮達到人們所希望的對食品的其它一些要求。雖然少量非病原微生物經口進入人體後，並不會對人體有什麼危害，可是豆奶中如有少量非病原微生物，在合適的溫度條件下，就會繁殖生長，最終導致豆奶的酸敗沉澱，不利於保存。如果豆奶中存在著大量非病原微生物，不僅難以保存，而且人體一次攝入大量雜菌，也會引起腸胃感染，發生疾病。從生產衛生角度看，豆奶中含有大量雜菌，是在生產過程中遭到嚴重污染或有較長時間繁殖生長的結果，是產品不合格的標志。因此，豆奶的熱殺菌是必須進行的；但為了保證豆奶的風味質量，殺菌溫度和時間必須選擇好。高溫長時間殺菌會促進美拉德反應，不但使豆奶的營養損失，而且顏色不良，風味劣化，嚴重時添加劑失效，豆奶穩定性下降。
如何既達到殺菌目的又能使豆奶滿足人們的營養和風味要求，需要根據產品特點選擇殺菌方法。常用的熱殺菌方法有以下幾種：
1.低溫長時間殺菌法（LTLT）：低溫長時間殺菌法是沿用已久的巴氏殺菌法，通常是把豆奶加熱到60-70℃保持30分鍾，故又稱保持式殺菌法。這種殺菌方法可殺死全部致病菌，但其殺菌效果一般只能達到99%以內，對嗜熱性細菌以及孢子等不易殺死，部分乳酸菌也能殘留下來。
2.高溫短時間殺菌法（HTST）：高溫短時間殺菌法是快速巴氏殺菌法，採用
80-85℃10-15秒鍾，或75-78℃15-40秒鍾的殺菌方法，其殺菌效果優於低溫長時間的方法，而且對豆奶成分的破壞少，但也不能殺死全部微生物，目的是為了除去致病菌。低溫長時間殺菌處理是一個間歇過程，高溫短時間殺菌理通常是在板式熱交換器中進行，廣泛用於熱敏性食品的生產，通過這兩種方式獲得的產品仍含有微生物，貯存與處理的過程需要冷藏。
用以上兩種方法殺菌的豆奶一般稱為消毒豆奶。有生產和銷售鮮牛奶條件的企業，可以生產消毒豆奶。因為生產消毒豆奶可簡化生產工藝和包裝材料，又不需加入穩定劑、乳化劑等添加成分，使成本大大下降，而且避免了高溫殺菌對豆奶質量的損害。但豆奶是營養極其豐富的食品，又處於中性條件，微生物極
易生長繁殖，只要豆奶中殘留下少量微生物，在溫度合適時，很快就繁殖生長起來，多數的場合是首先生酸，使豆奶中蛋白質凝固，進而腐敗變質。合格的消毒豆奶在常溫下（20℃）也只能存放1天（24小時），有低溫（4-8℃）條件下貯存，可存放3-5天，因此，消毒豆奶必須是以銷定產，當天生產，當天銷完。出廠之前，一定要放在冷藏（5-10℃）庫內，這在夏天尤須注意。
3.高溫保持滅菌法：此方法的滅菌溫度為121℃，蒸汽壓力0.14兆帕，滅菌時間為20-30分鍾（包裝豆奶），實際上，在121℃的條件下，4-5分鍾內即可殺死全部耐熱型芽孢，但考慮到包裝材料所需要的傳熱時間和豆奶中保護物質的存在，滅菌時間應適當延長一些。採取保持滅菌殺死了所有可以生長的微生物，所獲得的產品是商業無菌的，即達到不含毒素、不含致病菌、不含在正常的儲存和配送條件下有繁殖能力的微生物。因此，其貯存和運輸銷售不需要冷藏。
4.超高溫瞬間（UHT）滅菌法：此方法的滅菌溫度為138-150℃，蒸汽壓力為
0.5兆帕，滅菌時間只需數秒鍾。超高溫滅菌是通過短暫高強度的加熱使產品達到商業無菌程度。
後兩種方法都是高溫加壓殺菌法，又稱蒸汽滅菌法，其特點是可把微生物全部殺死，如果與無菌包裝結合，或者在包裝之後連同包裝物一起殺菌，即生產出無菌豆奶，選擇隔絕性好的包裝材料，可以在常溫下保存3-5個月，不會發生酸敗變質現象。
每種殺菌都會產生負面影響，產品會發生變化並因此影響其營養價值和感官特性。熱處理對蛋白質產生影響是多多少少改變了它的性質（變性過程只與蛋白質的物理狀態有關），其營養價值實際沒有多少變化；加熱對蛋白質中的氨基酸影響不大，主要是賴氨酸有損失，情況是：巴氏殺菌1%-2%、保持滅菌6%-10%
、超高溫（UHT）處理3%-4%;過度的熱處理會導致褐變，參與褐變反應的還原糖會有損失。巴氏消毒與超高溫瞬間滅菌不會產生該變化。但在較高的儲藏溫度（35-40℃）下，可能也會產生褐變；脂肪在不同的滅菌過程中，一般都不會受到
加熱的影響；礦物質基本上不受殺菌熱處理的影響，而其中可溶性鈣和磷酸鹽的含量可能會降低；在各類維生素中，維生素基本上不受巴氏殺菌和超高溫處理的影響；維生素滅菌過程中保持穩定；維生素被認為在受加熱的影響，其損失量取決於熱處理的程度；巴氏殺菌和超高溫處理引起維生素的損失區別很小；維生素很容易受到加熱的影響，尤其是保持滅菌過程中損失很大；葉酸也很容易受到加熱的影響，損失量基本上與維生素的情況相當。生物素和煙酸都具有穩定性，在滅菌過程受熱影響的損失有限。
在滅菌過程中，滅菌溫度低則需時間長，食品中熱敏性成分損失率隨溫度提高和時間延長而增加。隨著殺菌溫度的提高，滅菌所需要的時間快速減小，食品中熱敏性成分的損失率雖然會隨殺菌溫度的提高而提高，但又會隨殺菌時間的減小而降低，由於高溫殺菌所需時間很短，兩者抵減，食品中熱敏性成分在殺菌過程中的損失率會隨殺菌溫度的提高而趨向於減小。有資料指出，滅菌溫度為121℃時，殺死芽孢時間為4分鍾，某種成分保留率為70%.然而隨著溫度的增加，芽孢致死時間急驟減少；相反，食品成分保留率急劇上升。當滅菌溫度為132℃時，該成分保留率為90%,滅菌溫度達150℃時，其保留率在98%以上。
高溫短時間滅菌必須確實是在整個高溫階段的短時間，而不是在最高溫度這一點上的短時間。因此，在設備選擇上，要能夠使豆奶在瞬間把溫度提高到最高殺菌溫度，殺菌結束又能剎那間把溫度降到接和直接加熱兩種類型。
使用蒸汽直接加熱的方法，一般是先把豆奶預熱到70以上，再與高溫水蒸汽瞬間混合，把豆奶溫度提高到工藝殺菌要求。達到時間後，立即吸入真空罐閃蒸。由於蒸發吸熱，在極短的時間內（10秒）就使豆奶溫度降到85℃以下，並且把混入豆奶的冷凝水蒸發出去，同時可有效地除去豆奶中的不良風味。這是迄今最有效的豆奶殺菌和脫臭結合的方法。
採用電流直接加熱的方法是使豆奶通過電阻管的同時通過電流，並設法使電流主要通過管中流過的豆奶而不是外壁，從而使豆奶在極短的時間被加熱到140℃，這一專利方法克服了管式間接加熱使管壁的溫度太高產生結垢問題，及因此而產生的傳熱和清洗的困難，而且熱效率極高，可達80%以上。
4. 百合的鱗莖組培實驗的消毒方法，如何將0.1%的升汞用次氯化鈉代替，需要多少的naclo消毒時間是
摘要 組培脫毒法和程序 即莖尖脫毒法。主要是莖尖的選取和消毒、培養基制備等。
5. 生雞蛋如何滅菌
有些人喜歡吃生雞蛋。覺得雞蛋煮熟後營養成分就被破壞了，以為生吃比熟吃補身體。其實，這種吃法非但無益反而有害。一是雞蛋由雞的卵巢和泄殖腔產出，而它的卵巢、泄殖腔帶菌率很高，所以蛋殼表面甚至蛋黃可能已被細菌污染，生吃很容易引起寄生蟲病、腸道病或食物中毒。二是生雞蛋還有一股腥味，能抑制中樞神經，使人食慾減退，有時還能使人嘔吐。三是生雞蛋清中含有一種叫抗生物素的物質，這種物質防礙人體對雞蛋黃中所含的生物素的吸收。雞蛋煮熟後既可將雞蛋內外的細菌殺滅，又能破壞抗生物素，所以雞蛋不宜生吃。
無論如何還是吃煮雞蛋的好
6. 生物素是如何發揮作用的都有哪些反應要生物素的參與
生物素又名維生素H、輔酶R等，它的主要功能是在脫羧-羧化反應和脫氨反應中起輔酶作用，可以把CO2由一種化合物轉移到另一種化合物上，從而使一種化合物變成另一種化合物。葯理劑量的生物素還可以降低I型糖尿病人的血糖水平。
具體的就參考：http://ke..com/view/42737.htm
7. 求助，生物素可否高壓滅菌
生物素本身是有活性的，經過高壓滅菌生物素的活性也就喪失了。所以生物素不能高壓滅菌。
8. 嬰幼兒食品中生物素測定微生物法好做嗎
嬰幼兒奶粉中游離生物素的檢測方法有微生物法、色譜法、熒光法、ELISA法等，微生物法具有靈敏度高的特點，我國國家標准及國際上通常採用微生物法測定。但是由於各實驗室工作條件的差異，嚴格按照國標試驗條件通常無法取得可信的檢測結果，失敗率較高且檢測成本高[1-3]。因此，針對筆者所在實驗室情況對試驗條件進行簡化優化，以期提高試驗質量和檢測結果准確性，降低檢測成本。 1 材料與方法 1.1 試驗材料 供試菌種為植物乳桿菌（ATCC8014），由美國模式培養物集存庫提供。供試培養基為乳酸桿菌肉湯培養基（青島海博），游離生物素測定培養基（碧迪醫葯器械公司）。生物素標准品（上海安普）。供試儀器與設備：TU-1901 雙光束紫外可見分光光度計（北京普析）；LRH-250 生化培養箱（廣東醫療器械廠）；SIK-202凈化工作台（蘇凈集團安泰公司製造）；YXQ-LS-75S立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅）。 1.2 試驗方法 1.2.1 標准曲線的製作。樣品處理及標准曲線的製作及樣品測定的步驟參照GB5413.19-2010，接種時使用一次性無菌注射器垂直懸空滴加1滴菌液。標准曲線工作液濃度c=0.2 ng/mL。 1.2.2 標准曲線溶液配製方式的影響。使用乳桿菌肉湯培養基對菌種進行傳代活化，以第4代菌株制備菌懸液，菌懸液吸光度A=0.57，自標准中間液起分別使用超純水、50%乙醇溶液配製，分別進行標准曲線製作，每種方式重復試驗3次。 1.2.3 菌懸液濃度的影響。使用乳桿菌肉湯培養基對菌種進行傳代活化，使用超純水配製標准曲線工作液，以第4代菌株制備系列濃度菌懸液，菌懸液吸光度（A）分別為0.14、0.22、0.36、0.50、0.64、0.79，分別進行標准曲線製作。 1.2.4 傳代次數的影響。使用乳桿菌肉湯培養基對菌種進行傳代活化，使用超純水配製標准曲線工作液，分別以第1、2、3、4、5、6代菌株制備菌懸液，菌懸液吸光度依次為0.52、0.54、0.56、0.54、0.60、0.55，分別進行標准曲線製作。 2 結果與分析 為考察各因素對標准曲線線性的影響，考慮標准溶液配製方式、傳代培養基選擇、傳代次數及菌懸液濃度對試驗曲線線性的影響。 2.1 標准曲線溶液配製方式的影響 使用50%乙醇溶液配製標准工作液試驗標准曲線基本沒有線性，不能滿足試驗的線性要求，而使用超純水配製標准溶液試驗的標准曲線線性有極大提高，最高可達到0.991 2（表1、表2）， 3次結果均符合試驗要求。GB5413.19中要求使用50%乙醇溶液配製標准工作液，但是由於滅菌過程中的高溫及試管的氣密性問題造成乙醇揮發，導致測試管體積發生不均一變化導致曲線線性差，同時由於乙醇本身可抑制植物乳桿菌的生長，標准工作液中的乙醇不同程度地影響了試驗最終的微生物生長量也是造成線性差或無線性的原因。採用超純水配製可以避免這些問題的發生，有效提高曲線的線性。 2.2 菌懸液濃度的影響 菌懸液吸光度（A）在0.50～0.79曲線線性符合試驗要求，R2在此范圍內變化不大，菌懸液吸光度達到0.79時雖然線性基本符合試驗要求，但測試管內生長量過大，吸光度過大，對試驗結果有一定的影響，且試驗時間不宜控制，因此菌懸液吸光度在0.50～0.64較為適宜（圖1）。菌懸液濃度過低，標曲線性差的原因可能是濃度最高管生長終止時間過長，時間過長可能導致植物乳桿菌死亡而無法完全消耗最高濃度管生物素。 2.3 傳代次數的影響 1～5代的菌種均可滿足試驗要求，超過5代以後曲線線性明顯下降，可能原因是隨著傳代次數的增加，菌種發生變異，特異性發生改變，從而無法正常體現植物乳桿菌對生物素的特異性需求，而無法呈線性生長，導致試驗沒有線性或線性差（圖2）。 3 結論與討論 使用超純水配製標准曲線工作液、菌懸液吸光度A=0.57、第4代菌種制備菌懸液來製作標准曲線，曲線y=1.023 7x+0.180 8，R2=0.996 2。對不同樣品進行測定並做加標試驗，平均加標回收率為92%，加標回收率范圍為85%～97%，對同一樣品進行10次重復試驗，變異系數為3.56%。使用超純水配製標准曲線工作液、菌懸液吸光度A在0.50～0.64、不超過5代的菌種制備菌懸液的條件下，試驗准確度較高，重現性較好，同時採用5個濃度點來製作曲線，較國標方法不僅減輕了工作量而且降低了檢測成本，因此此試驗條件具有一定的可行性。 試驗過程中器皿的清洗、商品培養基的選擇、菌種使用乳桿菌肉湯培養基傳代活化、標准工作液臨用現配，注射器滴加菌種必須垂直懸空以及培養時間的控制等均是試驗成敗的關鍵。