如何從土壤中分離和純化微生物

⑴ 如何從復雜的土壤樣本中分離我們所需要的目標微生物

如何從復雜的土壤樣本中分離我們所需要的目標微生物？
有機肥之中有機質的分解轉化是一個復雜的過程，微生物活動在分解轉化過程之中起著重要作用。土壤環境非常適合微生物活動，所以土壤之中天然微生物數量最多。因為土壤之中微生物種類繁多，數量大；一克土壤之中，微生物有幾十種到幾百種，幾億到幾十億個，土壤微生物繁殖迅速，在有機質的轉化和分解之中起著重要作用。土壤微生物包括細菌、放線菌、真菌和藻類。

（1）細菌



細菌是一種單細胞微生物，是土壤之中分布最廣、數量最多的微生物。細菌有三種基本形態：球形、桿狀和螺旋形；有球菌、桿菌和螺旋體（40種）；包括弧菌&41；三種類型。土壤細菌按其營養類型可分為自養菌、兼性自養菌和異養菌。

（2） 真菌



土壤真菌分布廣泛，適應廣泛的酸性條件，在PH4.0條件之下生長良好，對森林土壤有機質的轉化起著重要作用。土壤真菌是異養的。它們必須從土壤有機質之中獲取能量和碳源，並在發育過程之中需要良好的供氧。根據真菌與樹木的關系及其營養類型，真菌可分為腐生真菌、寄生真菌和共生真菌。

（3） 放線菌



放線菌是細長的菌絲體，呈分枝狀或放射狀。它們在土壤之中僅次於細菌。大多數是腐生植物。許多放線菌能分解纖維素、澱粉、脂肪、木質素和蛋白質。

⑵ 土壤微生物分離與純化實驗原理和方法

一、實驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法，掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多，通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板，一般細菌則採用彼得羅夫· 霍澤（Petrof Hausser）細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同，只是細菌計數板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特製的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數區（圖 21-1），計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數區分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數區都由400個小方格組成。
計數區邊長為1mm，則計數區的面積為l mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後，計數區的高度為0.1mm，所以每個計數區的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1 /4000mm3。

⑶ 請問：怎樣分離提純微生物

1. 稀釋塗布平板法
(1) 倒平板 將肉膏蛋白腖瓊脂培養基， 高氏Ⅰ號瓊脂培養基；馬丁氏瓊脂培養基加熱溶化，待冷至55~60℃， 高氏Ⅰ號瓊脂培養基加入10%酚數滴，馬丁氏瓊脂培養基加入鏈黴素溶液。混勻後分別倒平板，每種培養基倒三皿；
(2) 制備土壤稀釋溶液 稱取土樣10g，放入盛有90ml無菌水並帶入玻璃珠的三角燒瓶，振動約20min，使土樣與水分混合，將細胞分散.用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，然後用無菌吸管從此試管中吸取1ml加入另一個盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此推製成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6不同稀釋的土壤溶液；
(3) 塗布 將上述每種培養基的三個平板地面分別用記號筆寫上10-4，10-5，10-6三種稀釋度，然後用無菌吸管分別由10-4，10-5，10-6三管土壤稀釋液中各取0.1ml對號放入已寫好室溫下靜置5~10min，使菌液吸附進培養基；
(4) 培養 將高氏Ⅰ號瓊脂培養基平板;馬丁氏瓊脂培養基平板倒置於28℃溫室中培養3~5day，肉膏蛋白腖平板倒置於37℃溫室中培養2~3day；
(5) 挑菌落 將培養後長出的單個菌落分別挑取少許細胞接種到上述三種培養基的斜面上，分別置28℃和37℃溫室培養，大菌苔長出後，檢查其特徵是否一致，同時將細胞塗片染色後用顯微鏡檢查是為單一的微生物。若發現有雜菌，需要再一次進行分離、純化，直到獲得純培養。
2.平板劃線分離法
(1)倒平板 按稀釋塗布平板倒平板，並用記號標明培養基名稱，土樣編號和實驗日期；
(2) 劃線 在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環，挑取上述的土壤懸液一環在平板上劃線.劃線的方法很多，但無論採用那種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋，使之形成單個菌落；
(3) 挑菌落 同稀釋塗布平板法，一直到分離的微生物認為純化為止。

⑷ 土壤中微生物怎樣分離純化培養

1、土樣採集：取10cm左右深層土壤10g備用。 
2、制備土壤稀釋液：稱取土壤1g，放入有99mL無菌水的三角瓶中，振盪均勻，即為稀釋10－2的土壤懸液。然後進行十倍梯度稀釋，依次制備 10－3、10－4、10－5
、10－6 、10－7 稀釋度的土壤稀釋液。                                                  3、培養基平板制備：按培養基配方各配置牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基、馬丁氏培養基、高氏Ⅰ號培養基各100ml。滅菌後分別倒3個平板。（高氏Ⅰ號培養基滅菌前加入10滴10%苯酚；馬丁氏培養基倒平板前加入2ml去氧膽酸鈉(2%)和0.4ml 1萬單位/ml鏈黴素） 
4、接種：用無菌吸管吸取0.1ml相應濃度土壤稀釋液，以無菌操作技術接種在平板上，塗布均勻。細菌選用10－4、10－5、10－6 三個稀釋度接種於牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基，放線菌與黴菌選用10－2  、10－3、10－4 三個稀釋度，分別接種於高氏Ⅰ號培養基、馬丁氏培養基。（一個稀釋度一個平板） 
5、培養：細菌平板於37℃恆溫培養1～2d，放線菌於30℃培養2～3d，黴菌於30℃培養3～5d ，觀察。 
6、計數：用稀釋水樣檢測平板的菌落計數方法進行計數，報告細菌總數/(CFU·ml-1) 
7、純化：挑取典型菌落接種於相應平板，培養條件同上，培養純化。

⑸ 如何從土壤中分離產纖維素酶的微生物

在培養基上只添加纖維素和其他一些必需物質如無機鹽，水，生長因子可以生活，或者說可以形成菌落的就只有可以產生纖維素酶的微生物了，因為只有它才可以把纖維素水解為葡萄糖並加以利用。

能夠分解纖維素的微生物很多。既有好氧性微生物，也有厭氧性微生物；既有細菌，也有放線菌和真菌。 好氧性纖維素分解細菌:食纖維菌屬和生孢食纖維菌屬是土壤中常見的好氧性纖維素分解細菌。多囊菌屬、鐮狀纖維菌屬與纖維弧菌屬。 許多放線菌能夠分解纖維素。

(5)如何從土壤中分離和純化微生物擴展閱讀：

水可使纖維素發生有限溶脹，某些酸、鹼和鹽的水溶液可滲入纖維結晶區，產生無限溶脹，使纖維素溶解。纖維素加熱到約150℃時不發生顯著變化 ，超過這溫度會由於脫水而逐漸焦化。纖維素與較濃的無機酸起水解作用生成葡萄糖等，與較濃的苛性鹼溶液作用生成鹼纖維素，與強氧化劑作用生成氧化纖維素。

將選好的工業木漿板疏解，送入已加1%～10%的鹽酸(用量為5%～10%)的反應釜進行升溫水解，溫度為90～100℃，水解時間0.5～2h，反應結束後經冷卻送人中和槽，用液鹼調至中性，過濾後濾餅在80～100℃下乾燥，最後經粉碎得產品。

⑹ 土壤微生物的分離方法

取土壤配好適當濃度的溶液，然後稀釋成十的負七次方或者六次方這樣。
用微生物接種的方法在酒精燈邊上稀釋液拿微滴管取500微升置入固體培養基，然後加入玻璃小球搖晃，這是為了讓稀釋液均勻分布。然後37度培養一天到兩天就行了，不能太久不然會長雜菌。
就是這樣吧，抱歉細節沒有寫，太長了。注意過程無菌

⑺ 如何送土壤中分離和培養一株微生物並獲得純培養

純種分離技術是微生物學中重要的基本技術之一.分離是指從混雜的微生物群體中獲得單一菌株純培養的方法.純種（純培養）是指一株菌種或一個培養物中所有的細胞或孢子都是由一個細胞分裂、繁殖而產生的後代. 微生物的分離與純化技術的應用：分離具有特殊功能的微生物、優良菌種及純化被污染的菌種等.

⑻ 將土壤中的微生物（細菌，真菌，放線菌）進行分離，純化，培養保藏的具體步驟及注意事項

1.用三種培養基培養，分別是牛肉膏蛋白腖培養基（用於細菌培養、分離）、馬鈴薯葡萄糖培養基（真菌培養），高氏1號培養基（放線菌）
2.培養一定時間，待菌長出，根據三種菌的菌落特點，選取菌種，用劃線法接種到各種菌對應的斜面培養基上，培養。
3.進行生化實驗，確定是否是你猜想的菌。三種菌的生化實驗具體我也不是很清楚。
如果覺得還滿意，請採納。謝謝！

⑼ 土壤微生物的分離方法（註：此類微生物不能純化分離）

一般分類細菌用10-7-8次濃度的土壤懸液細菌、10-5-6次放線菌、10-3-4次分離的是真菌。
微生物(microorganism），包括細菌、病毒、真菌以及一些小型的原生動物等在內的一大類生物群體，個體微小，與人類生活密切相關。廣泛涉及健康、醫葯、工農業、環保等諸多領域。在中國大陸地區的教科書中，均將微生物劃分為以下8大類：細菌、病毒、真菌、放線菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體。