生物材料在培養液裡面浮起來怎麼辦

A. 細胞培養時培養液出現渾濁這是什麼原因

培養基變渾濁的原因可能有如下幾點：
1、細胞存在污染，污染早期可以見到細胞生長；
2、不排除傳代時細胞密度過大，或者操作不當導致多數細胞不貼壁，大量細胞漂浮。
3、細胞破碎。

細胞培養中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染.他們在細胞培養中污染的特點如下：
1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯.
2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一.而且它不能用過濾的辦法除去.支原體感染細胞以後,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去.
3、黑膠蟲：可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的.常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象.對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之後會自然消失,除更換血清外無須特殊處理.
4、真菌：一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物.真菌生長的比較慢,不象細菌那麼容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了.
5、原蟲：培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮.他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養.這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,最終形成惡性循環.
6.病毒：組織細胞培養過程中,如果沒有除去潛在的病毒,就會產生病毒污染.目前,從原代猴腎細胞的培養中已發現不少於20種血清性病毒.盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生產疫苗是不安全的.因此,潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物製品製作中的難題 。
7、非同種細胞污染 ：即是細胞交叉污染,由於細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染.目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效.非細胞培養物所造成的化學成分的污染也偶有發生,大多是由於細胞培養所需物品清洗消毒不徹底而帶入一些有毒化學物質所致.

B. 植物細胞的液體懸浮培養中出現白色的球狀物，請問是

實驗原理:
植物細胞的懸浮培養是指將植物細胞或較小的細胞團懸浮在液體培養基中進行培養，在培養過程中能夠保持良好的分散狀態。植物離體培養可產生愈傷組織。將疏鬆型的愈傷組織縣浮在液體培養基中並在振盪條件下培養一段時間後，可形成分散縣浮培養物。良好的縣浮培養物應具備以下特徵：（1）主要有單細胞和小細胞團組成；（2）細胞具有量盛的生長和分裂能力，增殖速度快；（3）大多數細胞在形態上應具有分生細胞的特徵，它們多呈等徑形，核一質比率大，胞質濃厚，無液胞化程度較低。
在液體懸浮培養過程中應注意及時進行細胞繼代培養，因為當培養物生長到一定時期將進入分裂的靜止期。對於多數懸浮培養物來說，細胞在培養到第18～25d 時達到最大的密度，此時應進行第一次繼代培養。在繼代培養時，應將較大的細胞團塊和接種物殘渣除去。若從植物器官或組織開始建立細胞懸浮培養體系，就包括愈傷組織的誘導、繼代培養、單細胞分離和懸浮培養。目前這項技術已經廣泛應用於細胞的形態、生理、遺傳、凋亡等研究工作，特別是為基因工程在植物細胞水平上的操作提供了理想的材料和途徑。經過轉化的植物細胞再經過誘導分化形成植株，即可獲得攜帶有目標基因的個體。
主要試劑:
B5培養基加上0.2mg NAA（naphthalene acetic acid）的液體培養基（取3.2g B5粉末培養基，蔗糖30g，200ul體積質量為1mg/ml的NAA貯備液，溶於約800ml蒸餾水中，置於磁力攪拌器上混合均勻，pH計測定pH 值，1mol/l KOH調節pH值至5.8，加蒸餾水定容至1L，鋁箔紙封口後121℃滅菌20min，貯於4℃冰箱，接種前水浴或自然升至室溫）。
主要設備:
1. 超凈工作台
2. 高壓滅菌鍋
3. 旋轉式搖床
4. 水浴鍋
5. 倒置顯微鏡
6. 鑷子
7. 酒精燈
8. 三角瓶
9. 移液器
10. pH計
11. 恆溫培養室
12. 漏斗
13. 不銹鋼篩
14. 血球計數板等
實驗材料:
擬南芥愈傷組織
實驗步驟:
1. 用鑷子夾取出生長旺盛的松軟愈傷組織，放入三角瓶中並輕輕夾碎。每100ml三角瓶含滅過菌的培養基 10~15ml，每瓶接種1~1.5g愈傷組織，以保證最初培養物中有足夠量的細胞。
2. 將已接種的三角置於旋轉式搖床上。在100r/min，25~28℃條件下，進行振盪培養。
3. 經6~10天培養後，若細胞明顯增殖，可向培養瓶中加新鮮培養基10ml，必要時，可用大口移液管將培養物分裝成兩瓶，繼續培養。（若細胞無明顯增殖，可能是起始材料不適當，應考慮用旺盛增殖期的愈傷組織重新接種）。可進行第一次繼代培養。
4. 懸浮培養物的過濾：按「3」法繼代培養幾代後，培養液中應主要由單細胞和小細胞團（不多於20個細胞）組成。若仍含有效大的細胞團，可用適當孔徑的金屬網篩過濾，再將過濾後的縣浮細胞繼續培養。
5. 細胞計算。取一定體積的細胞縣液，加入2倍體積的8%的三氧化鉻（CrO3），置70℃水浴處理15min。冷卻後，用移液管重復吹打細胞懸液，以使細胞充分分散，混勻後，取一滴縣液置入血細胞計數板上計數。
6. 製作細胞生長曲線：為了解縣浮培養細胞的生長動態，可用以下方法繪制生長曲線圖：
1) 鮮重法（fresh weigh method）在轉代培養的不同時間，取一定體積的懸浮培養物，離心收集後，稱量細胞的鮮重，以鮮重為縱座標，培養時間為橫座標，繪制鮮重增長曲線。
2) 乾重法（dry weigh method ）可在稱量鮮重之後，將細胞進行曲烘乾，再稱量乾重。以乾重為縱坐標，培養時間為橫坐標，繪制細胞乾重生長曲線。
上述兩種方法均需每隔2天取樣一次，共取7次，每個樣品重復三次，整個實驗進行期間不再往培養瓶中換入新鮮培養液。
7. 細胞活力的檢查。對於初學者，往往需要檢測活細胞的比率。可在培養的不同階段，吸取一滴細胞縣液，放在載玻片上，滴一滴0。1%的酚藏花紅溶液（用培養基配製）染色，在顯微鏡下觀察。幾活細胞均不著色，而死細胞則很快被染成紅色。也可用0。1%熒光雙醋酸酯溶液染色，凡活細胞將在紫外光誘發下顯示藍絕色熒光，有經驗的操作者，則可根據細胞形態，胞質環流判別細胞的死活。
8. 細胞再生能力的鑒定：為了解懸浮培養細胞是否仍具有再生能力，可將培養細胞轉移到瓊脂固化的培養基上，使基再形成愈傷組織，進而在分化培養基上，誘導植株的分化。
注意事項:
1. 上述步驟均滅菌操作，培養基、用具、器皿等要高壓滅菌後方可使用。
2. 如培養液混濁或呈現乳白色，表明已污染。
3. 每次繼代培養時，應在倒置顯微鏡下觀察培養物中各類細胞及其它殘余物的情況以有意識地留下圓細胞，棄去長細胞。

C. 肉湯瓊脂培養基滅菌後有絮狀沉澱怎麼辦

肉湯瓊脂培養基滅菌後有絮狀沉澱怎麼辦
滅菌時的過高溫度常對培養基造成不良影響。如：
1.出現混濁和沉澱(天然培養基成分加熱沉澱出大分子多肽聚合物；培養基中Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Sb等陽性離子與培養基中的可溶性磷酸鹽共熱沉澱)。
2.營養成份破壞或改變(酸度較高時澱粉、庶糖、乳糖或瓊脂滅菌過程易水解;pH7.5,0.1MPa滅菌20min，葡萄糖破壞20%，麥芽糖破壞50%，若培養基中有磷酸鹽共存，葡萄糖轉變成酮糖類物質，培養液由淡黃色變成紅褐色，破壞更為嚴重。
3.pH7.2時培養基中的葡萄糖、蛋白腖、磷酸鹽在0.1MPa滅菌15min以上可產生對微生物生長的某種抑制物。
4.高壓蒸汽滅菌後培養基pH下降0.1--0.3。
5.高壓蒸汽滅菌的過程會增加冷凝水，降低培養基成份濃度。對於前三種不良影響，可採用低壓滅菌(如在0.056MPa、30min滅菌葡萄糖溶液)，或將培養基幾種成份分別滅菌，臨 用前無菌混合(如磷酸鹽與Ca、Mg、Fe、Zn、Cu等陽性離子溶液)的方法，特殊情況可採用間歇滅菌、過濾除菌(如維生素溶液)。工業發酵中採用的連續加壓滅菌法(135--140攝氏度，5--15s)和連續蒸煮法。

D. 細胞培養黴菌污染怎麼辦

1 黴菌污染後多數在培養液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見，較易倍發現，短期內培養液多不渾濁，倒置顯微鏡下可見細胞之間有縱橫交錯穿行的絲狀、管狀及樹枝狀菌絲，並懸浮漂盪在培養液中。很多菌絲在高倍鏡下可見到有鏈狀排列的菌株；念珠菌或酵母菌形態呈卵形，散在細胞周邊和細胞之間生長。有時通過顯微鏡觀察可能發現瓶底外面生長的菌絲，不要錯當培養瓶內的污染。瓶外的污染物，需及時用乙醇棉球擦洗清除，以防其通過瓶口傳入瓶內。
2 培養細胞的污染一旦明確，多數將無法救治。如果污染的細胞不是具有重要價值，一般發現污染後應盡快棄之，以防污染擴大影響其他細胞。
3 如為黴菌污染可以考慮採用制黴菌素25ug/ml或酮康唑10ug/ml對細胞進行處理。

E. 在恆溫培養箱中打翻了一個培養基,培養液跑出來一些,但液體只在金屬板上，沒有掉到下層水槽中，怎麼辦

培養基被打翻了，這種情況建議清潔一下。
使用結束關閉電源，清潔搖床。為了安全，在取出樣品時，一定要關閉電源；

操作進行中海生物培養基培養的時候也要遵循正確的培養箱使用方法
1. 操作人員需仔細閱讀使用說明，了解、熟悉培養箱功能後，才能接通電源。
2. 接通電源，按下電源開關，此時電源指示燈亮。
3. 把溫度控制儀調到用戶所需的設定溫度值。
4. 當培養箱顯示溫度達到設定溫度時，加熱中斷、加熱指示燈熄滅，在標准環境溫度下通電90分鍾後，溫度可保持穩定，如箱內即時溫度超過設定上限報警溫度，控溫儀溫度跟蹤報警指示燈亮，同時自動切斷加熱器電源。
5. 如打開玻璃門取樣品時，加熱器、循環風機會停止工作，當關上玻璃門後，加熱器和風機才能正常運轉，這樣可避免培養物的污染及溫度的過沖現象。

注意事項
1. 我國市電為交流220V、50Hz，使用前注意培養箱標識的電源電壓是否與此相符，並進行有效接地，以保證使用安全。
2. 培養箱無防爆裝置，不得放入易燃易爆物品。
3. 物品放置切勿過擠、過重，四周必須留出空間，以利熱空氣循環，防止隔板損壞。
4. 水套式培養箱保持箱內水位在合適范圍。
5. 在使用中，切忌用手觸碰風扇或用水沖洗。
6. 當使用高溫時，應注意燙傷。
7. 非必要時，不得打開溫度控制系統。

維護及保養
1. 保持培養箱表面整潔、美觀。
2. 培養箱應放置在具有良好通風條件的室內，其周圍不可放置易燃易爆物品。
3. 箱內物品放置切勿過擠，必須留有空間。
4. 箱內外應保持清潔，每次使用完畢應當進行清潔，長期不用應蓋好防塵罩，放在乾燥室內。
5. 設備管理人員根據檢定計劃進行計量檢定，並定期對溫度控制情況進行檢查。
6. 夏季環境溫度較高時，當設定溫度低於40℃時，應採用「空調」降低環境溫度（25-28℃，夜間必須保持此溫度），以避免引起溫度失控。
7. 培養箱不可放置在高溫或潮濕的地方，避免陽光直射。
8. 培養箱內的風扇定期加註潤滑膏脂。
9. 長期不用，應將水套內的水放掉，在電鍍件上塗抹中性油脂或凡士林，以防腐蝕，培養箱外面套好塑料防塵罩，將培養箱放在乾燥的室內，以免溫度控制器受潮損壞

F. 高二生物。 植物細懸浮培養的原理是什麼定義是什麼和植物組織...

目的要求是了解植物細胞懸浮培養的基本原理，通過實驗掌握植物細胞懸浮培養的方法和技術。並通過實驗練習和鞏固無菌操作技術。
基本原理：
利用固體瓊脂培養基對植物的離體組織進行培養的方法在植物遺傳實驗中已經得到廣泛的應用。但這種方法在某些方面還存在一些缺點，比如在培養過程中，植物的愈傷組織在生長過程中的營養成分、植物組織產生的代謝物質呈現一個梯度分布，而且瓊脂本身也有一些不明的物質成分可能對培養物產生影響，從而導致植物組織生長發育過程中代謝的改變而利用液體培養基則可以克服這一缺點，當植物的組織在液體培養基中生長時，我們可以通過薄層震盪培養或向培養基中通氣用以改善培養基中氧氣的供應。植物細胞的懸浮培養是指將植物細胞或較小的細胞團懸浮在液體培養基中進行培養，在培養過程中能夠保持良好的分散狀態。這些小的細胞聚合體通常來自植物的愈傷組織。
一般的操作過程是把未分化的愈傷組織轉移到液體培養基中進行培養。在培養過程中不斷進行旋轉震盪，一般可用100～12Or/min 的速度進行。由於液體培養基的旋轉和震盪，使得愈傷組織上分裂的細胞不斷游離下來。在液體培養基中的培養物是混雜的，既有游離的單個細胞，也有較大的細胞團塊，還有接種物的死細胞殘渣。
在液體懸浮培養過程中應注意及時進行細胞繼代培養，因為當培養物生長到一定時期將進入分裂的靜止期。對於多數懸浮培養物來說，細胞在培養到第18～25d 時達到最大的密度，此時應進行第一次繼代培養。在繼代培養時，應將較大的細胞團塊和接種物殘渣除去。若從植物器官或組織開始建立細胞懸浮培養體系，就包括愈傷組織的誘導、繼代培養、單細胞分離和懸浮培養。目前這項技術已經廣泛應用於細胞的形態、生理、遺傳、凋亡等研究工作，特別是為基因工程在植物細胞水平上的操作提供了理想的材料和途徑。經過轉化的植物細胞再經過誘導分化形成植株，即可獲得攜帶有目標基因的個體。

G. 細胞培養漂浮的碎屑是污染還是其他原因

細胞培養漂浮的碎屑是污染還是其他原因
細胞培養過程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質，包括生物和化學物質。
培養細胞受細菌污染後，會出現培養液變混濁，pH改變。也有的培養液肉眼觀察無多少改變，只能在鏡下發現菌體才知污染。所以，每天應仔細觀察。污染後細胞發生病理改變，胞內顆粒增多、增粗，最後變圓脫落死亡，造成試驗失敗和細胞株(系)丟失。
培養細胞受真菌污染後，可見培養液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長，培養液一般不發生混濁；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養基中，有的呈鏈狀排列。念珠菌和酵母菌呈卵圓形散在細胞周邊和細胞之間。個體細小，有增多趨勢。鏡下看時，要將培養瓶用酒精棉球擦乾凈，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆。真菌污染後，細胞生長變慢，但最後由於營養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。
支原體是介於細菌與病毒之間能獨立生活的最小微生物，最小直徑0.2μm，一般過濾除菌無法去除它，光鏡下難以看清它的形態結構。開始不易發現，能在偏鹼條件(pH7.6～8.0)下生存，對青黴素有抗葯性，多吸附於細胞表面或散在於細胞之間。電鏡下可見其有三層結構，無細胞壁，中央有電子密度大的密集顆粒或絲狀的中心囊。

H. 懸浮細胞在培養過程中，總覺得培養液比較臟，細胞形態也不一樣。 可能是死細胞的原因，怎麼凈化懸浮細胞

一般培養的懸浮細胞的確容易出現這個情況。我養過的懸浮細胞種類不多，就個人經驗而言。
1.從復甦細胞開始，要了解細胞的生長周期，尤其是出現指數生長期的時間段。盡量將細胞控制在一個合理的培養階段，不要貪圖省力貿然將細胞培養密度調小，或者認為過一個周末多個半天不處理也沒有關系；除非你已經做過生長周期的確認；
2.有些懸浮細胞在平面培養環境中，會貼服在培養表面，雖然不會像貼壁細胞一樣，但也不容易飄起來，但是在不斷傳代中會出現貼壁越來越差的情況，這個時候需要小心控制，僅保留貼壁的細胞傳代，這樣細胞就可以棄上清處理，死細胞或者分化的細胞就可以去掉
3.控制傳代次數，復甦與凍存的記錄要清楚，否則細胞狀態很不穩定。
4.分化過程中如果出現過多的變異細胞，尤其是演變成完全貼壁的細胞（出現類偽足），建議不要用了，重新復甦。
一般這樣處理的細胞的培養液還是比較干凈的。個人實驗經驗，僅供參考。

I. 紅茶菌在溶液中是不是浮上來了,就表示死了 它死了的話會有哪些現象 該如如何辨別紅茶菌是否存活

紅茶菌在溶液中浮上來不是死了，死了的紅茶菌會沉底，變小，菌膜會出現變黃，變黑或變綠的情況。正常存活的紅茶菌應該是菌液表面結成乳白色新鮮菌膜，培養液即發酵成甜酸的紅茶菌液。

為了避免紅茶菌發生變質壞死的情況，在培養時需要注意以下幾點：

1、作好消毒工作。

2、要選擇新鮮的菌液及菌膜。

3、應選用沒有處理過的天然綠茶，紅茶等茶葉。糖選用白砂糖，少使用蜂蜜，蜂蜜不純，雜質多。水選擇潔凈的井水，泉水，有消毒劑的自來水禁用。

4、糖，茶，水的投放量。培養液第一次做要少放，第二次有經驗可以加倍。

5、靜置，通風，避陽光直射。

(9)生物材料在培養液裡面浮起來怎麼辦擴展閱讀

紅茶菌的食用注意事項：

1、過敏反應：尤其是患有酸過敏的人，飲用紅茶菌可能會感覺不舒服，因為紅茶菌含有有機酸。

2、細胞因子的活性過度活躍刺激自身免疫系統造成一些反應。

3、自身的一些疾病或者腎臟與膀胱功能相對較弱造成的。如果本身腎臟功能不強或者毒素太多，然後喝的劑量太多，會導致腎臟超負荷工作。

4、有些初飲者服用紅茶菌後會有的副作用，如興奮、失眠、胃酸、輕度腹瀉、皮膚發癢等。

J. 細胞傳代後不貼壁了，成團浮在培養基里，怎麼辦

看下培養液顏色，是不是要更換培養液了，做下活性檢測，看是不是有污染，細胞是不是死了。細胞和人一樣，環境不舒服的時候就會表現出來的，養細胞是個細心活，慢慢來