㈠ 介紹幾種緩沖溶液
第四節 緩沖溶液
一、緩沖溶液與緩沖作用原理
（一）緩沖作用與緩沖溶液
純水在25℃時PH值為7.0，但只要與空氣接觸一段時間，因為吸收二氧化碳而使PH值降到5.5左右。1滴濃鹽酸（約12.4mol·L-1）加入1升純水中，可使[H＋]增加5000倍左右（由1.0×10-7增至5×10-4mol·L-1），若將1滴氫氧化鈉溶液（12.4mol·L-1）加到1升純水中，PH變化也有3個單位。可見純水的PH值因加入少量的強酸或強鹼而發生很大變化。然而，1滴濃鹽酸加入到1升HOAc-NaOAc混合溶液或NaH2PO4-Na2HPO4混合溶液中，[H+]的增加不到百分之一（從1.00×10-7增至1.01×10-7mol·L-1）,PH值沒有明顯變化.這種能對抗外來少量強酸\強鹼或稍加稀釋不引起溶液PH值發生明顯變化的作用叫做緩沖作用;具有緩沖作用的溶液,叫做緩沖溶液。
（二）緩沖溶液的組成
緩沖溶液由足夠濃度的共軛酸鹼對組成。其中，能對抗外來強鹼的稱為共軛酸，能對抗外來強酸的稱為共軛鹼，這一對共軛酸鹼通常稱為緩沖對、緩沖劑或緩沖系，常見的緩沖對主要有三種類型。
1．弱酸及其對應的鹽 例如，HOAc-NaOAc（實際上是OAc-）；H2CO3-NaHCO3；H2C8H4O4-KHC8H4O4（鄰苯二甲酸-鄰苯二甲酸氫鉀）；H3BO3-Na2B4O7（四硼酸鈉水解後產生H2BO-3）。
2．多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽，例如，NaHCO3-Na2CO3；NaH2PO4-Na2HPO4；NaH2C5HO7（檸檬酸二氫鈉）-Na2HC6H5O7；KHC8H4O4-K2C8H4O4。
3．弱鹼及其對應的鹽 例如NH3-NH+4CL-；RNH2-RNH+3A-（伯胺及其鹽）；Tris-TrisH+A-（三羥甲基烷及其鹽）。
（三）緩沖溶液的作用原理
現以HOAc-NaOAc緩沖溶液為例，說明緩沖溶液之所以能抵抗少量強酸或強鹼使PH穩定的原理。醋酸是弱酸，在溶液中的離解度很小，溶液中主要以HOAc分子形式存在，OAc-的濃度很低。醋酸鈉是強電解質，在溶液中全部離解成Na+和OAc-，由於同離子效應，加入NaOAc後使HOAc離解平衡向左移動，使HOAc的離解度減小，[HOAc]增大。所以，在HOAc-NaOAc混合溶液中，存在著大量的HOAc和OAc-。其中HOAc主要來自共軛酸HOAc，OAc-主要來自NaOAc。這個溶液有一定的[H+]，即有一定的PH值。
在HOAc-NaOAc緩沖溶液中，存在著如下的化學平衡：
在緩沖溶液中加入少量強酸（如HCL），則增加了溶液的[H+]。假設不發生其他反應，溶液的PH值應該減小。但是由於[H+]增加，抗酸成分即共軛鹼OAc-與增加的H+結合成HOAc，破壞了HOAc原有的離解平衡，使平衡左移即向生成共軛鹼HOAc分子的方向移動，直至建立新的平衡。因為加入H+較少，溶液中OAc-濃度較大，所以加入的H+絕大部分轉變成弱酸HOAc，因此溶液的PH值不發生明顯的降低。
在緩沖溶液中加入少量強鹼（如NaOH），則增加了溶液中OH-的濃度。假設不發生其他反應，溶液的PH值應該增大。但由於溶液中的H+立即加入的OH-結合成更難離解的H2O，這就破壞了HOAc原有的離解平衡，促使HOAc的離解平衡向右移動，即不斷向生成H+和OAc-的方向移動 ，直至加入的OH-絕大部分轉變成H2O，建立新的平衡為止。因為加入的OH－少，溶液中抗鹼成分即共軛酸HOAc的濃度較大，因此溶液的PH值不發生明顯升高。
在溶液稍加稀釋時，其中[H+]雖然降低了，但[OAc-]同時降低了，同離子效應減弱，促使HOAc的離解度增加，所產生的H+可維持溶液的PH值不發生明顯的變化。所以，溶液具有抗酸、抗鹼和抗稀釋作用。
多元酸的酸式鹽及其對應的次級鹽的作用原理與前面討論的相似。例如，在NaH2PO4-Na2HPO4溶液中存在著離解平衡：
HPO2-4是抗酸成分，通過平衡移能對抗外加酸的影響。H2PO2-4是抗鹼成分，通過平衡右移能對抗外加鹼的影響。
弱鹼及其對應鹽的緩沖作用原理，例如，NH3-NH4CL（即NH3-NH+4）溶液中，NH3能對抗外加酸的影響是抗酸成分，NH+4能對抗外加鹼的影響是抗鹼成分。前者通過下述平衡向右移動而抗酸，後者通過平衡向左移動而抗鹼，從而使溶液的PH值穩定。
二、緩沖溶液PH的計算
（一）亨德森方程式
在緩沖溶液例如HOAc－NaOAc溶液中，有以下的離解平衡：
等式兩邊各取負對數，則
即
HOAc的離解度比較小，由於溶液中大量的OAc-對HOAc所產生的同離子效應，使HOAc的離解度變得更小。因此上式中的[HOAc]可以看作等於HOAc的總濃度[共軛酸]（即緩沖溶液中共軛酸的濃度）。同時，在溶液中NaOAc全部離解，可以認為溶液中[OAc-]等於NaOAc的總濃度[共軛鹼]（即配製的緩沖溶液中共軛鹼的濃度）。將[共軛酸]和[共軛鹼]代入上式，則得
（3-11)
上式稱為亨德森-哈塞爾巴赫方程式，簡稱為亨德森（Henderson）方程式。它表明緩沖溶液的
PH值決定於共軛酸的離解常數Ka和組成緩沖溶液的共軛鹼與共軛酸濃度的比值。對於一定的共軛酸，PKa為定值，所以緩沖溶液的PH就決定於兩者濃度的比值即緩沖比。當緩沖溶液加水稀釋時，由於共軛鹼和共軛酸的濃度受到同等程度的稀釋，緩沖比是不變的；在一定的稀釋度范圍內，緩沖溶液的PH值實際上也幾乎不變。
式(3-11)中的濃度項指的是混合溶液中共軛酸鹼的濃度,而不是混合前的濃度.若混合前共軛酸的量濃度是c酸,體積是V酸,共軛鹼的量濃度是c鹼,體積是V鹼,則式(3-11)可改寫成：
（3-12）
若兩種溶液的量濃度相等，則
（3-13）
若是等體積的兩溶液相混合，則
（3-14）
以上幾種形式都稱為亨德森方程式，可用以計算各種組成類型緩沖溶液的PH近似值。當用於弱酸及其對應的鹽組成的緩沖溶液的PH值時，PKa即弱酸的離解常數負對數（見書後附表），[共軛鹼]即[弱酸鹽]。當用於多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽組成緩沖溶液的PH值時，共軛酸即酸式鹽，pKa即該酸式鹽負離子的離解常數的負對數，共軛鹼即該酸式鹽的次級鹽。例如，NaHCO3－Na2CO3緩沖溶液的PH值：
（3-15）
式中PKa即H2CO3的PKa2。
同樣，NaH2PO4－Na2HPO4緩沖溶液的PH值：
（3-16）
式中PKa為H3PO4的PKa2。
弱鹼和它的共軛酸緩沖溶液的PH值也可根據式（3-11）計算。
（二）緩沖溶液PH值計算舉例
例5 0.1mol.L-1的HOAc500mL與0.2mol.L-1的NaOAc250mL配成緩沖溶液，計算溶液的pH值。
解：把所給條件代入式（3-11），由書後附表查得HOAc的pKa=4.75，則得：
例6 將0.3mol.L-1HOAc溶液10mL與0.1mol.L-1NaOH溶液10mL混合後製成緩沖溶液，試計算這個溶液的pH值（2.5℃時，HOAc時pKa=4.75)。
從反應看出HOAc有1/3被OH-中和，生成OAc-和H2O，溶液的總體積為20mL。
例7 H2PO2-4已知的pKa=7.21，求濃度為0.100mol.L-1、pH7.40的磷酸鹽緩沖溶液的緩沖比以及共軛鹼HPO2-4和共軛酸H2PO2-4的濃度。
解：設[H2PO2-4]為χmol.L-1,因緩沖溶液的總濃度（共軛酸濃度+共軛鹼濃度）為已c=0.100mol.L-1,故[H2PO2-4]=（0.100-χ）mol.L-1
根據式（3-11）或式（3-14）：
緩沖比為
χ=0.061,[HPO2-4]=0.061mol.L-1
0.100- χ=0.100-0.061=0.039,[ H2PO2-4]=0.039mol.L-1
三、緩沖容量與緩沖范圍
（一）緩沖容量
緩沖能力的強弱，可用緩沖容量β表示。緩沖容量也叫緩沖值或緩沖指數。
如圖3-1所示，對任何一種緩沖溶液的每一個PH值，都有其相應的緩沖量。緩沖容量實際上是一個微分比，可定義為：使1升緩沖溶液的PH值增高很小一個數值dPH時，需加入的強鹼物質的量為db，則db與dPH之比值叫緩沖容量，用數學式表示為β=db/dPH緩沖mol·L－1·PH－1。如總濃度（即共軛酸與共軛鹼濃度之和）為0.100mol·L－1PH4.45的HOAc-NaOAc緩沖溶液(即醋酸緩沖溶液)的緩沖容量為0.051(mol·L－1·PH－1)。
圖3-1 醋酸緩沖溶液在不同緩沖比時的緩沖容量
在實際工作中，我們可以通過測量加入強鹼的增量Δb（或加入強酸，相對於減少強鹼量-Δb），同時測量相應的PH值的增量ΔPH（或加入強酸，PH減小，-ΔPH），從兩者比值求得β。因此緩沖容量在數值上等於使1毫升緩沖溶液的PH值改變1個單位時所必須加入的強鹼或強酸的物質的量（通常單位用毫摩）。 （3-17）
加入鹼Δb以後，溶液PH值增大，加入酸以後（相當於減去Δb），溶液PH值減小，所以β總是正值。
（二）影響緩沖容量的因素
緩沖容量的大小與緩沖溶液的緩沖比和總濃度有關。設m和n分別為緩沖比中共軛酸和共軛鹼的數值，即[共軛鹼]：[共軛酸]=n：m，c總為總濃度，用下式可計算緩沖容量β：
或β=2.30×[共軛酸]×[共軛鹼]/ c總(3-18)
從式(3-18)及圖3-1可以看出,緩沖溶液的緩沖容量取決於緩沖溶液的總濃度及緩沖比.可得出如下結論：
1．當緩沖溶液的緩沖比一定時，溶液的PH值也一定。緩沖溶液的緩沖容量取決於緩沖溶液的總濃度和緩沖比的比值。
2．當緩沖溶液的PH值一定時，即緩沖比垢比值一定時，緩沖溶液的總濃度越大，則加入少量強酸或強鹼所引起緩沖比的比值變化越小，PH改變越小，緩沖容量就越大。圖3-1表示兩種總濃度都一定的醋酸緩沖溶液的β分別隨緩沖比和PH改變的情況。總濃度為0.1mol·L－1和0.05 mol·L－1的醋酸緩沖溶液,當緩沖比為1:1時，PH為4.75，β分別為0.0575和0.0288（mol·L－1·PH－1），總濃度大的溶液緩沖容量較大。從式（3-18）也可見，當緩沖比一定即m和n的數值一定時，β與緩沖溶液的總濃度成正比。總濃度一般在0.05-0.20mol·L－1范圍內。
3．當緩沖溶液的總濃度一定時，它的緩沖容量以緩沖比等於1（即[共軛鹼]=[共軛酸]）時為最大。這時溶液的PH=PKa。當溶液的緩沖比與1偏離愈遠，則PH值與PKa的偏差也隨著增大，溶液的緩沖容量也隨著減小。當溶液的緩沖比大於10/1或小於1/10時，則溶液的緩沖容量極小，一般認為沒有緩沖能力。從圖3-1看出，對總濃度一定的緩沖溶液來說，當緩沖比愈接近於1：1，緩沖容量愈大；當緩沖比等於1：1，即緩沖溶液的PH值等於PKa時，緩沖容量達極大值（β極大）。當m=n=1，式（3-18）成為
β極大=2.30×1/2×1/2×β極大=0.575β極大 （3-19）
4．由足夠濃度的共軛酸鹼對組成的溶液，只能在一定的PH值范圍內發揮有效的緩沖作用。這個能發揮有效緩沖作用的PH范圍，叫緩沖范圍。當緩沖比為1/10時，PH=PKa-1；當緩沖比為10/1時，PH=PKa+1。故緩沖范圍PH值大致在PKa-1至PKa+1約兩個PH單位范圍內，即在
PH= PKa±1
的近似范圍內，才能表現出緩沖作用。而且同一溶液在不同的PH值時，緩沖容量也不相同。從圖3-1，緩沖超出此范圍時，β值很小（＜0.01），已無緩沖作用。
5．不同緩沖對所組成的緩沖溶液，由於共軛酸的PKa值不同，因此它們的緩沖范圍也各不相同（表3-6）。
例8 將0.20mol.L-1NaOH溶液0.15mL加入10mLpH值為4.73的緩沖溶液中，緩站溶液的pH值變為4.78，試求此緩沖溶液的緩沖容量。
解：每毫升緩沖溶液中加入NaOH的毫摩爾數
△b=0.20*0.15/10
△pH=4.78-4.73
表3－6 幾種常用緩沖溶液中共軛酸的PKa及緩沖范圍
緩沖溶液的組成 共軛酸的PKa 緩沖范圍
H2C8H4O4（鄰苯二甲酸）-NaOH(即H2C8H4O-4-HC8H4O-4) 2.89(PKa1) 2.2～4.0
KHC8H4O4( )- NaOH(鄰苯二甲酸氫鉀)（即HC8C4O-4-C8H4O2-4) 5.41(PKa2) 4.0～5.8
HOAc- NaOH(即HOAc-OAc-) 4.75 3.7～5.6
KH2PO4-Na2HPO4 7.21(PKa2) 5.8～8.0
Htris+-Tris[三（羥甲基）氨基甲烷-HCL] 8.21 7.1～8.9
H3BO3- NaOH(即H3BO3-H2BO-3) 9.14(PKa1) 8.0～10.0
NaHCO3-Na2CO3(即HCO-3-CO2-3) 10.25(PKa2) 9.2～11.0
例9 （1）求0.100mol.L-1醋酸緩沖溶液的緩沖容量極大值；（2）已知醋酸的pK=4.75，求0.100mol.L-1pH4.45的醋酸緩沖溶液的緩沖容量。
解：（1）當緩沖溶液的緩沖比為1：1，即m=1和n=1時，緩沖容量達極大值。已知ca=0.100mol.L-1。則由式（3-19）
β極大=0.575c總=0.575*0.100=0.0575(mol.L-1.pH-1)
（2）根據式（3-11），
所以 緩沖比 [OAc-]/[HOAc]=0.50/1
即 m－1 n=0.5
代入式(3-18)得
四、緩沖溶液的配製
在配製具有一定PH值的緩沖溶液時，為了使所得溶液具有較好的緩沖能力，應注意以下原則：
1．選擇適當的緩沖對，使配製溶液的PH值在所選擇的緩沖對的緩沖范圍內。這個范圍大約在PKa±1之內。例如HOAc-OAc-緩沖對的范圍是3.7-5.6，要配製PH從3.7-5.6之間的緩沖溶液可選用這一緩沖對。
2．緩沖對中作為共軛酸的PKa，應盡量接近於配製溶液的PH值。例如，要配製PH為5.3的緩沖溶液時，可以選用HOAc-OAc＝或HC8H4O4-C8H4O2-4緩沖對，因為pH5.3恰恰在這兩種緩沖對的緩沖范圍內。但是，前者的共軛酸的PKa 為4.75；後者共軛酸的PKa 為5.4，所以選用HC8H4O-4-C8H4O2-4配製的緩沖溶液較選用前者有更大的緩沖容量。
3．要有一定的總濃度（通常在0.05-0.20mol·L－1之間）使所配成溶液具有足夠的緩沖容量,並採用適當的緩沖比使溶液的pH恰好等於所需要的PH值。
在具體配製時，為了簡便起見，常用相同濃度的共軛酸鹼溶液。此種情況可用式（3-13）計算所需兩種溶液的體積。然後根據體積比，把共軛酸鹼兩種溶液混合，即得所需的緩沖溶液。設溶液的總體積是V總，則式（3-13）改寫成
或
例10 如何配製100mL pH值為5.10的緩沖溶液？
解：根據配製緩沖溶液的原則，可選擇HOAc-OAc-緩沖系來配製。因pH=5.10，pKa=4.75，V總=100L，故
配製緩沖溶液還可採用共軛酸中加氫氧化鈉或共軛鹼中加鹽酸的辦法。兩種方法都可組成有足夠濃度的共軛酸鹼對的緩沖溶液。
例11 欲配製pH值為5.10的緩沖溶液，計算在50mL的0.1ml.L-1HOAc溶液中應加0.1mol.L-1NaOH溶液多少mL？
故χ=34.6（mL）（NaOH）
在50mL0.1mol.L-1HOAc溶液中加入34.6mL0.1mol.L-1NaOH溶液即得所需緩沖溶液。
應用亨德森方程式來配製緩沖溶液，沒有考慮溶液的離子強度的影響。
一些緩沖溶液的配製法可查閱參考書或附錄克拉克緩沖系列及鹼性緩沖系列表，其准確度較高，表中的濃度及體積都要求准確。表中稀釋值ΔPH1/2表示緩沖溶液用等體積水稀釋後Ph 的變化。Tris緩沖系適合生理學和生物化學要求，比較常用。
五、緩沖溶液在醫學上的意義
人體內各種體液的PH值具有十分重要的意義。它們均控制在一狹小范圍內。因為只有在這范圍內，機體的各種功能活動才能正常進行。離開正常范圍的少許變化尚能允許，但如變化太大，都可能引起體內許多功能失調。
在體內差不多每項代謝的結果都有酸產生，如有機食物被完全氧化而產生碳酸，嘌呤被氧化而產生尿酸，碳水化合物的厭氧分解而產生乳酸以及因氧化作用不完全而導致乙醯乙酸和в-羥基丁酸的生成等。體內代謝也生成磷酸和硫酸。代謝過程也可以產生NaHCO3。這些代謝產生的酸或鹼進入血液並沒有引起PH值發生明顯的變化，這說明血液具有足夠的緩沖作用。也說明體內有著有效的生理作用支配著體內能及時地得到緩沖物的不斷補充。
正常人血漿的PH值相當恆定。血液所以具有緩沖作用，是因為血液是一種很好的緩沖溶液。血液中存在下列緩沖系（HA表示有機酸）：
在這些緩沖系中，碳酸氫鹽緩沖系（HCO-3/H2CO3）在血液中濃度很高，對維持血液正常PH值的作用很重要。其次紅細胞中的血紅蛋白和氧合血紅蛋白緩沖系也很重要。這些緩沖系中的共軛酸（如H2CO3）起抗鹼作用，共軛鹼（如HCO-3）起抗酸作用，使PH值保持正常。
由於H2CO3-NaHCO3（或CO2-HCO-3）緩沖系在血漿中存在如下平衡：
當人體內各組織和細胞在代謝中產生的酸進入血液時，血液中CO2-HCO-3緩沖系的共軛鹼HCO-3就和H+反應，並轉變為其共軛酸H2CO3及CO2，即上述H2CO3離解平衡向左移動。因碳酸僅輕度離解，所以，等於把加入的H+從溶液中有效地除去，維持PH基本不變。而溶解的CO2轉變為氣相CO2從肺部呼出。如果代謝產生的鹼進入血液，則上述血液中的離解平衡向右移動，從而抑制PH值的升高。而血液中升高的[HCO-3]可通過腎臟功能的調節使其濃度降低。
血液中其他緩沖系的抗酸抗鹼作用和CO2-HCO-3緩沖作用的原理相似。而且，當產生CO2過多時，主要是通過血紅蛋白和氧合血紅蛋白運送到肺部排出，或通過磷酸緩沖系使[CO2]降低。至於降低的[HCO-3]也可以通過腎臟功能的調節使其在血液中的濃度升高，從而使[CO2]、[HCO-3]和[HCO-3]/[CO2]（溶解）都恢復正常。肺呼吸快些或慢些可調節CO2的量或酸量（呼吸慢則CO2積蓄）；而腎的功能之一是調節血液中HCO-3的濃度及磷酸鹽緩沖系的含量。肺和腎臟的協同調節操持[HCO-3]/[CO2]（溶解）=20/1，雖然這時緩沖比超出（10/1）-（1/10）范圍，可是緩沖容量仍然很大。總之，血液PH值能保持正常范圍，是多種緩沖對的緩沖作用以及有效的生理調節作用的結果。
微生物的培養，組織切片和細菌染色，以及研究酶的催化，都需用一定PH值的緩沖溶液。在臨床檢驗中，常把血液中HCO-3的濃度看作「鹼儲備」，作為一種常規來檢查，也需要緩沖作用的知識。理解緩沖作用的基本原理和掌握這方面的基本實驗知識，在醫學上有重要的意義。
㈡ 緩沖溶液的主要用途有哪些
緩沖液是一種能在加入少量酸或鹼和水時抵抗pH改變的溶液.PH緩沖系統對維持生物的正常pH值,正常生理環境起重要作用.多數細胞僅能在很窄的pH范圍內進行活動,而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化.在生物體中有三種主要的pH緩沖體系,它們時蛋白質、重碳酸鹽緩沖體系.每種緩沖體系所佔的分量在各類細胞和器官中是不同的.
在生化研究工作中,常常要用到緩沖溶液來維持實驗體系的酸鹼度.研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到我們工作的成效.如果提取酶實驗體系的pH值變化或變化過大,會使酶活性下降甚至完全失活.所以我們要學會配製緩沖溶液.
由弱酸及其鹽組合一起使具有緩沖作用.生化實驗室常常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羥甲基氨基甲烷）等系統,在生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因為有時影響實驗結果的因素並不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子.如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產生不需要的反應.
硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖.
檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用.
磷酸鹽：在有些實驗,它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物,重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉澱出來.而且它在pH7.5以上時緩沖能力很小.
三羥甲基氨基甲烷：它可以和重金屬一起作用,但在有些系統中也起抑止的作用.其主要缺點時溫度效應.這點往往被忽視,在室溫pH是7.8的Tris一緩沖液,在4℃時是8.4,在37℃時是7.4,因此,4℃配製的緩沖液拿到37℃測量時,其氫離子濃度就增加了10倍.而且它在pH7.5以下,緩沖能力很差.
緩沖液的pH值由哪些因素決定?
設緩沖系統的弱酸的電離常數為K（平衡常數）,平衡時弱酸的濃度為[酸],弱酸鹽的濃度為[鹽],則由弱酸的電離平衡式可得下式：
根據此式可得出下列幾點結論：
（1）緩沖液的pH值與該酸的電離平衡常數K及鹽和酸的濃度有關.弱酸一定,但酸和鹽的比例不同時,可以得到不同的pH值.當酸和鹽濃度相等時,溶液的pH值與PK值相同.
（2）酸和鹽濃度等比例也增減時,溶液的pH值不便.
（3）酸和鹽濃度相等時,緩沖液的緩沖效率為最高,比例相差越大,緩沖效率越低,一般地說緩沖液有效緩沖范圍為PK±1pH.
從上述可知,只要知道緩沖對的PK值,和要配製的緩沖液的pH值（及要求的緩沖液總濃度）時,可按公式計算出[鹽]和[酸]的量.這樣算涉及到對數的換算,較麻煩,前人為減少後人的計算麻煩,經計算已為我們總結出pH值與緩沖液對離子用量的關系列出了表格.講義附錄部分節錄有磷酸緩沖液的配製表.只要我們知道要配製的緩沖液的pH,經查表便可計算處所用緩沖劑的比例和用量.例如配製500nmpH5.8濃度為0.1M磷酸緩沖液.
經查表知pH5.8濃度為0.2M Na2HPO48.0毫升,而0.2M Na2HPO492.0毫升.依此可推論出配製100ml0.1M的磷酸緩沖液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升.
計算好後,按計算結果稱好葯品,放於燒杯中,加少量蒸餾水溶解,轉移入50ml容量瓶,加蒸餾水至刻度,搖勻,便得所需的緩沖液.
各種緩沖溶液的配製,均按下表按比例混合,某些試劑,必須標定配成准確的濃度才能進行,如醋酸、NaOH等.
㈢ 生物緩沖液生物實驗中需要配製哪些緩沖液
簡稱：PB或者PB緩沖液.
配製:
0.2M磷酸緩沖液
磷酸緩沖液PH5.7--8.0(0.2M)
甲液：
NaH2PO4·2H2O：Mr=156.03，0.2mol/L溶液為31.21g/L，
NaH2PO4·H2O：Mr=138.01，0.2mol/L溶液為27.6g/L。
乙液：
Na2HPO4·2H2O：Mr=178.05，0.2mol/L溶液為35.61g/L，
Na2HPO4·7H2O：Mr=268.13，0.2mol/L溶液為53.624 g/L ，
Na2HPO4·12H2O：Mr=358.22，0.2mol/L溶液為71.64g/L。
磷酸緩沖液PH5.7--8.0(0.2M)
PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml) PH 甲液X(ml) 乙液Y(ml)
㈣ 0.1mol/L,PH=7.5磷酸緩沖液配製方法配比
以下是具體配方：以100毫升0.2摩爾PH為7的為例磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的緩沖液
用時稀釋20倍就可以。（微生物實驗一般情況PH為7）
A稱取7.164克12水合磷酸氫二鈉，加水定容到100毫升。
B稱取3.121克1水合磷酸二氫鈉，加水定容到100毫升。
取A液61毫升，B液39毫升混合即為100毫升0.2摩爾PH為7的為例磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的緩沖液。
pH ---1 mol/L Na2HPO4 的體積/ml---- 1 mol/L NaH2PO4 體積/ml
5.8------7.9----- 92.1
6 -------12------ 88
6.2----- 17.8---- 82.2
6.4----- 25.5---- 74.5
6.6----- 35.2---- 64.8
6.8----- 46.3---- 53.7
7 -------57.7---- 42.3
7.2----- 68.4---- 31.6
7.4----- 77.4 ----22.6
7.6----- 84.5 ----15.5
7.8 -----89.6 ----10.4
8 -------93.2 ----6.8
㈤ 生理鹽水，無菌水，磷酸鹽緩沖液三者有何區別
1. 生理鹽水一般有兩種配法：0.85%和0.90%兩種，前者是我們食品衛生微生物學用得多，後者醫學方面用得多。主要用來做稀釋液或做葯物溶液用
2. 鹽水殺菌要看是什麼濃度的啦，一般而言鹽水殺菌濃度並不好，而生理鹽水主要是為了給微生物細胞一個相對穩定的滲透壓罷了，防止細胞因滲透壓改變而破裂或脫水死亡。
3. 磷酸鹽緩沖液（PBS）具有較強的緩沖能力，因此也可為細胞維持一個較為穩定的pH環境，避免細胞受損害。
4. 2003版的黴菌酵母菌檢測標准之所以還有無菌水一說，是因為94版中有高鹽查氏培基，該培基本身含鹽分較高，故制定者為了避免應用生理鹽水導致不必要的後果而加入了無菌水作為稀釋液。後來2003版已經刪除了該培基，但卻不小心繼續保留無菌水這一說。
㈥ 微生物實驗時磷酸鹽緩沖液和磷酸鹽稀釋液一樣嗎
：常用范圍： 磷酸氫二鈉–磷酸二氫鈉緩沖液: 5.8-8.0; 磷酸氫二鈉–磷酸二氫鉀緩沖液: 4.92-8.18; 磷酸二氫鉀–氫氧化鈉緩沖液:5.8-8.0
㈦ 緩沖液的分類是什麼
緩沖溶液
開放分類： 化學
緩沖溶液buffer solution
緩沖液是一種能在加入少量酸或鹼和水時抵抗pH改變的溶液。PH緩沖系統對維持生物的正常pH值，正常生理環境起重要作用。多數細胞僅能在很窄的pH范圍內進行活動，而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩沖體系，它們時蛋白質、重碳酸鹽緩沖體系。每種緩沖體系所佔的分量在各類細胞和器官中是不同的。
在生化研究工作中，常常要用到緩沖溶液來維持實驗體系的酸鹼度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到我們工作的成效。如果提取酶實驗體系的pH值變化或變化過大，會使酶活性下降甚至完全失活。所以我們要學會配製緩沖溶液。
由弱酸及其鹽組合一起使具有緩沖作用。生化實驗室常常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羥甲基氨基甲烷）等系統，在生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結果的因素並不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產生不需要的反應。
硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖。
檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。
磷酸鹽：在有些實驗，它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉澱出來。而且它在pH7.5以上時緩沖能力很小。
三羥甲基氨基甲烷：它可以和重金屬一起作用，但在有些系統中也起抑止的作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視，在室溫pH是7.8的Tris一緩沖液，在4℃時是8.4，在37℃時是7.4，因此，4℃配製的緩沖液拿到37℃測量時，其氫離子濃度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，緩沖能力很差。
緩沖液的pH值由哪些因素決定？
設緩沖系統的弱酸的電離常數為K（平衡常數），平衡時弱酸的濃度為[酸]，弱酸鹽的濃度為[鹽]，則由弱酸的電離平衡式可得下式：
根據此式可得出下列幾點結論：
（1）緩沖液的pH值與該酸的電離平衡常數K及鹽和酸的濃度有關。弱酸一定，但酸和鹽的比例不同時，可以得到不同的pH值。當酸和鹽濃度相等時，溶液的pH值與PK值相同。
（2）酸和鹽濃度等比例也增減時，溶液的pH值不便。
（3）酸和鹽濃度相等時，緩沖液的緩沖效率為最高，比例相差越大，緩沖效率越低，一般地說緩沖液有效緩沖范圍為PK±1pH。
從上述可知，只要知道緩沖對的PK值，和要配製的緩沖液的pH值（及要求的緩沖液總濃度）時，可按公式計算出[鹽]和[酸]的量。這樣算涉及到對數的換算，較麻煩，前人為減少後人的計算麻煩，經計算已為我們總結出pH值與緩沖液對離子用量的關系列出了表格。講義附錄部分節錄有磷酸緩沖液的配製表。只要我們知道要配製的緩沖液的pH，經查表便可計算處所用緩沖劑的比例和用量。例如配製500nmpH5.8濃度為0.1M磷酸緩沖液。
經查表知pH5.8濃度為0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推論出配製100ml0.1M的磷酸緩沖液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
計算好後，按計算結果稱好葯品，放於燒杯中，加少量蒸餾水溶解，轉移入50ml容量瓶，加蒸餾水至刻度，搖勻，便得所需的緩沖液。
各種緩沖溶液的配製，均按下表按比例混合，某些試劑，必須標定配成准確的濃度才能進行，如醋酸、NaOH等。
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㈧ 微生物實驗室常用試劑有那些往XDJM指點一二
微生物學實驗室常用試劑與培養基
第一節 常用試劑及其使用方法
一、診斷用紙片
⑴ 桿菌肽紙片（0.04U/片）：抑菌圈>10mm為敏感。質控菌株: D群鏈球菌陰性, A群鏈球菌陽性。
⑵ SMZ紙片（1.25μg/片、23.75μg/片）：出現抑菌圈即為敏感。質控菌株：D群鏈球菌陽性， A群鏈球菌陰性。
⑶ 新生黴素紙片（5.0μg/片）：抑菌圈≥16mm為敏感。質控菌株：表皮葡萄球菌陽性，腐生葡萄球菌陰性。
⑷ O129紙片、奧普托欣（Optochin）紙片：參見第五節《生化試驗培養基》。
二、診斷用血清
1.沙門菌屬診斷血清
⑴ A-F群O多價診斷血清。
⑵ 特異O群因子診斷血清：常用的有O2，O4，O7，O9，O10診斷血清。
⑶ 特異H因子診斷血清 常用的有Ha，Hb，Hc，Hd，Hgm，Hi，Hf、Vi因子診斷血清。
2.志賀菌屬診斷血清
志賀菌屬4種多價血清：痢疾志賀菌Ⅰ、Ⅱ血清，福氏志賀菌多價血清及分型血清（1～6型），宋內志賀菌診斷血清，鮑氏志賀菌多價血清及分型血清。
3.致病性大腸埃希菌診斷血清
腸致病性大腸埃希菌（EPEC）診斷血清，產腸毒素大腸埃希菌（ETEC）診斷血清，腸侵襲性大腸埃希菌（EIEC）診斷血清，腸出血性大腸埃希菌（EHEC）診斷血清O157： H 7。
4.霍亂弧菌O1、O139混合多價診斷血清及稻葉、小川、彥島O139分型血清
5.腦膜炎奈瑟菌多價血清及分群血清
6.鏈球菌分類診斷血清
7.肺炎鏈球菌診斷血清
8.耶爾森菌診斷血清
三、常用染色液
1.革蘭染色液
⑴ 結晶紫溶液 A液：結晶紫 20g，95%乙醇20 ml； B液：草酸銨 0.8g， 蒸餾水80 ml。
染色前24h將A液、 B液混合,過濾後裝入試劑瓶內備用。
⑵ 碘液:碘1g，碘化鉀2g，蒸餾水300ml。
將碘與碘化鉀混合並研磨,加入幾毫升蒸餾水, 使其逐漸溶解,然後研磨,繼續加入少量蒸餾水至碘、碘化鉀完全溶解。最後補足水量。也可用少量蒸餾水將碘化鉀完全溶解,再加入碘片,待完全溶解後,加水至300ml。
⑶ 脫色液：95%乙醇
⑷ 復染液：沙黃2.5g，95%乙醇100ml為貯存液，取貯存液10ml，加蒸餾水90ml為應用液。
2.抗酸染色液
⑴ 鹼性復紅染色液： ①萋納石炭酸復紅溶液：鹼性復紅乙醇飽和溶液10ml，5%石炭酸溶液90ml。 ②脫色液：濃鹽酸3ml，95%乙醇97ml。③復染液(呂弗勒美藍液)：美藍乙醇飽和溶液30ml，100g/L氫氧化鉀溶液0.1ml，蒸餾水100ml。
⑵ 金胺O-羅丹明B染色液： ①羅丹明B液：羅丹明B 0.1g加蒸餾水100ml。②1g/L金胺O液：金胺O液0.1g加蒸餾水95ml,再加入純石炭酸 5ml,混勻。③3%鹽酸乙醇。④稀釋美藍液：呂弗勒美藍液100ml,加蒸餾水90ml,混勻。
3.鞭毛染色液(改良Ryu法)
A液：5%石炭酸10ml，鞣酸2g，飽和硫酸鋁鉀溶液 10ml； B液：結晶紫乙醇飽和液。應用液A液10份,B液1份,混合,室溫存放備用。
4.異染顆粒染色液
甲液：甲苯胺藍 0.15g，孔雀綠 2g/L， 95% 乙醇2.0ml，蒸餾水100ml。乙液：碘 2g，碘化鉀3g，蒸餾水300ml。
先將碘化鉀加入少許蒸餾水(約2ml),充分振搖,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解後, 加蒸餾水至300ml。
5.莢膜染色液
⑴ 印度墨汁或50g/L黑色素水溶液
⑵ 5g/L苯胺藍水溶液。
第二節 基礎培養基
一、液體基礎培養基
1.蛋白腖水
[用途]
用於細菌靛基質試驗；一般細菌培養和傳代。
[配法]
蛋白腖（或胰蛋白腖）10g，氯化鈉 5g，蒸餾水1L。
將上述成分溶於水中，校正pH 至7.2,分裝試管，每管2~3ml，置121℃滅菌15min備用。
[質量控制]
大腸埃希菌生長良好，靛基質陽性；傷寒沙門菌生長良好，靛基質陰性。
2.營養肉湯
[用途]
一般細菌的增菌培養，加入1%的瓊脂粉亦可作營養瓊脂。
[配法]
蛋白腖10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，蒸餾水1L。
將上述成分稱量混合溶解於水中，校正pH至7.4，按用途不同分裝於燒瓶或試管內。經121℃滅菌15min，作無菌試驗後冷藏備用。
[質量控制]
金黃色葡萄球菌、傷寒沙門菌、化膿性鏈球菌生長良好。
[保存]
置冰箱3周內用完。
3.牛肉浸液培養基
[用途]
細菌培養最基礎的培養基，除用於一般細菌的培養外，又可以作營養瓊脂及其它培養基的基礎。
[配法]
新鮮除脂牛肉 500g，氯化鈉5g
蛋白腖10g，蒸餾水1L。
先將牛肉清洗，除脂肪、肌腱，並切塊絞碎。稱取500g置容器加入蒸餾水1L，攪勻後置冰箱過夜，次日煮沸加熱30min，並用玻棒不時攪拌用絨布或麻布進行粗過濾，再用脫脂棉過濾即成。在過濾中加入蛋白腖10g、氯化鈉5g溶解後，用氫氧化鈉溶液校正pH至7.6~7.8，並加熱煮沸10min，補充蒸餾水至1L，最後用濾紙過濾，呈清晰透明、淡黃色液體，經121℃15min滅菌備用。
[用法]
根據用途不同可以製成營養肉湯，以此為基礎製成其它培養基。如製作固體培養基，加入瓊脂15 ~20g/L即可。
[質量控制]
金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、傷寒沙門菌、痢疾志賀菌等均生長良好。
[保存]
置4℃冰箱內可以使用較長時間。
注:商品牛肉浸膏粉，一般使用量為3～5g/L。
二、固體基礎培養基
1.營養瓊脂
[用途]
一般細菌和菌株的純化及傳種。 [配法]
蛋白腖10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂粉（優質）12g，蒸餾水1L。
將上述成分(除瓊脂外)溶於水中，校正pH 7.2～7.4後加入瓊脂，煮沸溶解，根據用途不同進行分裝，經121℃滅菌15min，傾注平板或製成斜面，冷藏備用。
[質量控制]
金黃色葡萄球菌菌落呈淺黃色； 痢疾志賀菌菌落無色；銅綠假單胞菌 菌落無色或淺綠色。
[保存]
置4℃冰箱保存，2周內用完。
2.血瓊脂培養基
[用途]
一般病原菌的分離培養和溶血性鑒別及保存菌種。
[配法]
pH 7.4~7.6牛肉浸液瓊脂 100ml，脫纖維羊血(或兔血) 5~10ml。
將血瓊脂基礎經121℃滅菌15min，待冷卻至50℃左右以無菌手續加入羊血，搖勻後立即傾注滅菌平皿內，待凝固後，經無菌實驗冷藏備用。
[質量控制]
化膿性鏈球菌ATCC 19615生長良好，β-溶血；肺炎鏈球菌ATCC 6303生長良好，α-溶血；表皮葡萄球菌ATCC 12228 生長良好,不溶血。
[保存]
置4℃冰箱，1周內用完。
3.巧克力瓊脂培養基
[用途]
主要用於嗜血桿菌的分離培養，亦可用於奈瑟菌的增殖培養。
[配法]
鮮牛肉浸出液1L， 蛋白腖10g,
氯化鈉5g，瓊脂粉12g，無菌脫纖維
羊血或兔血100ml。
將上述成分（除兔血外）加熱溶解，調pH至7.2，置121℃15min高壓滅菌，待冷至約85℃，以無菌方式加入兔血，搖勻後置85℃水浴中，維持該溫度10min，使之成巧克力色。取出置室溫冷至約50℃，傾注平板或製成斜面備用。
[質量控制]
流感嗜血桿菌ATCC 10211、肺炎鏈球菌ATCC 6305生長良好，菌落典型。
[保存]
置4℃冰箱，1周內用完。
4.胱氨酸胰化酪蛋白瓊脂
[用途]
常用於測定腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌以及營養要求較高細菌的糖發酵試驗。
[配法]
胱氨酸0.5g, 胰化酪蛋白20g,氯化鈉5g，亞硫酸鈉0.3g，瓊脂3.5g，酚紅0.0175g，蒸餾水1L。
將上述成分（酚紅除外）混合溶解，調pH至7.2，加入酚紅指示劑。分裝試管，115℃滅菌15min。
[用法]
用於測定糖發酵時，按需要加入各種糖溶液，將待檢標本直接種於培養基管內，置35℃孵箱，18~24h觀察結果。培養基由紅色變為黃色為陽性，不變色為陰性。
第三節 保存和增菌培養基
一、菌種保存培養基
[配法]
蛋白腖10g，牛肉膏5g，氯化鈉3g，磷酸氫二鈉2g，瓊脂粉4.5g，蒸餾水1L 。
將上述成分混合於水中，加熱溶解，調pH至7.4~7.6，分裝試管2/3左右高度，121℃高壓滅菌15min，成為半固體培養基，備用。
[質量控制]
培養基呈淡黃色半固體狀。大腸埃希菌(ATCC 25922)生長良好,動力陽性；福氏志賀菌(ATCC 12022)生長良好,動力陰性；金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)生長良好,動力陰性。
二、增菌培養基
1.葡萄糖肉湯
[用途]
用於血液增菌。
[配法]
蛋白腖(或月示 腖)10g，氯化鈉5g，肉浸液（或心浸液）1L，葡萄糖3g，枸櫞酸鈉3g，5g/L對氨基苯甲酸水溶液10ml，1mol/L硫酸鎂溶液20ml，青黴素酶1000 U。
將蛋白腖、氯化鈉混合於肉浸液中加熱溶解，再加入葡萄糖、枸櫞酸鈉、對氨苯甲酸及硫酸鎂，繼續煮沸5min，並補足失水，調整pH至7.8。
過濾分裝，每瓶50ml，高壓滅菌115℃20min後，每瓶加入青黴素酶50 U，經無菌試驗合格後，冷卻備用。
[用法]
將採取的血液標本，以無菌手續注入培養瓶中（血液1ml，培養液10ml），置35℃培養箱內，每天1次取出觀察結果。如有細菌生長，可出現數種不同的表現，應隨時作分離培養，可選用血瓊脂、伊紅美藍瓊脂及巧克力瓊脂平板等。無細菌生長表現的培養瓶，需連續觀察7d，仍無細菌生長方可棄去。在觀察的過程中，至少應作兩次分離培養。
注:
⑴ 枸櫞酸鈉為抗凝劑，可使血液加入培養基中不凝固。
⑵ 對氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺類葯物的抑菌作用。
⑶ 硫酸鎂主要抑制血液中存在的四環素、金黴素、新黴素、多粘菌素及鏈黴素的抑菌作用。
⑷ 本培養基近年來有許多改良配方，如加入0.3%～0.5%酵母浸膏以增加營養；加0.2%核酸刺激細菌生長；加0.1%粘液素能被覆於細菌的表面，保護細菌免受抗體破壞；加入聚茴香腦磺酸鈉（SPS）能中和補體的抗葯作用從而提高檢出率。
2.血液增菌培養基
[用途]
血液和骨髓液病原菌的增菌培養。
[配法]
蛋白腖10g，氯化鈉5g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，酵母膏粉3g，枸櫞酸鈉3g，磷酸氫二鉀2g，5g/L對氨基苯甲酸溶液5ml，1mol/L硫酸鎂溶液20ml， 4g/L酚紅溶液6ml，青黴素酶50 U，聚茴香腦磺酸鈉(SPS) 0.3g，蒸餾水1L。
將上述成分（除酚紅指示劑、青黴素酶外）混合加熱溶解，校正pH至7.4，再加酚紅，過濾分裝每瓶30～50ml，經121℃滅菌15min和35℃24h無菌試驗備用。臨用時每瓶加入1.5～2.5 U青黴素酶。
[質量控制]
傷寒沙門菌ATCC 50096、白色念珠菌ATCC 10231、化膿性鏈球菌ATCC 19615、肺炎鏈球菌ATCC 6305、金黃色葡萄菌ATCC 25923、銅綠假單胞菌ATCC 27853均生長良好。
3.亞硒酸鹽增菌培養基
[用途]
沙門菌增菌培養。
[配法]
蛋白腖5g，乳糖4g，磷酸氫二鈉4.5g，磷酸二氫鈉5.5g，亞硒酸氫鈉4g，蒸餾水1L。
先將亞硒酸鹽加到200ml蒸餾水中，充分搖勻溶解。其它成分稱量混合，加入蒸餾水800ml，加熱溶解，待冷卻後兩液混合，充分搖勻，校正pH 7.0~7.1(通過調整磷酸鹽緩沖對的比例來校正pH值)。最後分裝於15×150mm的試管內，每管10ml。置水浴隔水煮沸10~15min，立即冷卻，置4℃冰箱保存備用。
[用法]
取新鮮標本1g或棉拭子采樣直接種於該培養管內。搖動後置35℃培養過夜。如發現均勻混濁，管底有紅色沉澱物，表示細菌生長。然後取培養物分離在選擇性培養基上，如SS瓊脂、麥康凱瓊脂平板等，進行培養。
[質量控制]
培養基應呈淡黃色或無色，透明無沉澱物。增菌靈敏度：傷寒沙門菌1×10-5，鼠傷寒及副傷寒沙門菌1×10-7。
[保存]
4℃保存，1周內用完。
註：
⑴ 亞硒酸鹽，包括亞硒酸鈉、亞硒酸氫鈉均可使用，但以亞硒酸氫鈉效果為好。
⑵ 磷酸鹽緩沖對中，兩者的用量比例與亞硒酸鹽及蛋白腖的品種有關。制備前應進行調試，其總量為10g/L。
⑶ 在制備過程中，亞硒酸鹽不能直接加熱。隔水煮沸時間亦不能超過規定時間，否則亞硒酸鹽會變質，生成紅色沉澱物。
⑷ 培養基應呈淡黃色，有紅色沉澱物出現時不可再用。
4.SS增菌液
[用途]
用於沙門、志賀菌的增菌。
[配法]
月示 腖 2g，蛋白腖8g，牛肉膏3.5g，酵母膏2g，葡萄糖2g，枸櫞酸鐵10g，硫代硫酸鈉10g，亞硫酸鈉0.7g，膽鹽5.5g，磷酸氫二鈉4g，磷酸二氫鉀0.1g，去氧膽酸鈉(進口) 1.5g，煌綠0.005g，蒸餾水1L。
將上述成分加熱溶於水中，調pH至7.1，分裝試管（15×150mm），每管5~7ml，隔水煮沸5min備用。
[用法]
取糞便標本1g直接種於增菌液內，35℃16~18h培養，取出轉種於分離培養基即可。
[質量控制]
培養基應呈淡黃色或略呈淡綠色。傷寒沙門菌ATCC 50096、福氏志賀菌ATCC 12022 生長良好；大腸埃希菌ATCC 25922 生長抑制。
註：
⑴ 切勿高壓，隔水煮沸時間不超過5min。
⑵ 煌綠用量應根據不同產品批號酌情增減。
5.鹼性蛋白腖水
[用途]
霍亂弧菌增菌培養。
[配法]
蛋白腖 20g，氯化鈉5g，蒸餾水100ml。
將上述成分溶解於水中,校正pH 至8.6，分裝於試管8~10ml，經121℃滅菌15min備用。
[用法]
將待檢標本接種到鹼性腖水中，置35℃培養6~8h，霍亂弧菌呈均勻混濁生長，表面有菌膜出現。取表面菌液一白金環移種到鹼性瓊脂、慶大瓊脂或TCBS瓊脂平板上。必要時做第二次增菌。
[質量控制]
有條件的實驗室可用標准菌株，一般臨床實驗室可用非01群弧菌，培養後生長良好者方可使用。霍亂弧菌E1-Tor生物型和副溶血弧菌生長良好（6h）；大腸埃希菌ATCC 25922不生長（6h）。
[保存]
置4℃冰箱，2周內用完。
註：若在每升鹼性腖水中加入1%亞碲酸鉀溶液0.5~1.0 ml，則成為亞碲酸鉀鹼性腖水，其增菌效果更為理想。
第四節 分離培養基
一、革蘭陽性桿菌分離培養基
1.羅-琴改良培養基
[用途]
用於結核分枝桿菌培養。
[配法]
磷酸二氫鉀2.4g，硫酸鎂0.24g，枸櫞酸鎂(或枸櫞酸鈉) 0.6g，天門冬素3.6g，甘油12ml，蒸餾水600ml，馬鈴薯澱粉30g，新鮮雞卵液1L，2%孔雀綠水溶液20ml。
先將磷酸鹽、硫酸鎂、枸櫞酸鎂、天門冬素及甘油，加熱溶解於600ml蒸餾水中。再添放馬鈴薯粉，邊放邊攪，並繼續置沸水中加熱30min，待冷卻至60℃左右時，加入雞卵液1L及孔雀綠溶液20ml，充分混勻後，用無菌操作分裝於滅菌試管，每支5~6ml，塞緊橡皮塞（最好是翻口塞），置於血清凝固器內製成斜面，經85℃1h間歇滅菌2次(或高壓滅菌115℃20min)，待凝固後經無菌試驗，4℃冷藏備用。
[用法]
取晨咳痰或其它體液標本，經消化處理和離心沉澱的濃縮液0.1ml（約2滴）滴種於培養基的斜面上，盡量搖晃，置35℃5%~10%二氧化碳溫箱內培養1~4周，觀察結果。凡在1周內發現生長的菌落，一般不可能是結核分枝桿菌；在2周後生長的菌落，奶油狀，略呈黃色，粗糙突起，不透明，即取菌進行塗片染色鏡檢及鑒定。
[質量控制]
用結核分枝桿菌菌株作陽性培養試驗。
[保存]
置4℃冰箱內2~4周有效。
註：
⑴ 本培養基由Lowenstein-Jenden設計的基礎上改良。
（2）本培養基pH約為6.0左右，一般無須校正。
（3）間歇滅菌的溫度不宜超過90℃。
2.血清斜面培養基(呂氏血清斜面)
[用途]
用於白喉棒狀桿菌培養。
[配法]
1%葡萄糖肉湯(pH 7.6)100ml，無菌動物血清(牛、羊、豬、兔) 300ml。
將上述成分混合後，分裝於試管內，每管約4~5ml。斜插在血清凝固器內（或蒸籠）加熱80~85℃30min，使血清凝固成斜面，冷卻後放4℃冰箱內。取出後採用間歇滅菌法，85℃滅菌30min，連續3天，經無菌試驗證明無雜菌生長即可應用。
微生物學實驗室常用試劑與培養基 第一節 常用試劑及其使用方法 分類:默認欄目2006.2.21 20:54 作者：hbmzhsh | 評論：2 | 閱讀：1037
微生物學實驗室常用試劑與培養基
第一節 常用試劑及其使用方法
一、診斷用紙片
⑴ 桿菌肽紙片（0.04U/片）：抑菌圈>10mm為敏感。質控菌株: D群鏈球菌陰性, A群鏈球菌陽性。
⑵ SMZ紙片（1.25μg/片、23.75μg/片）：出現抑菌圈即為敏感。質控菌株：D群鏈球菌陽性， A群鏈球菌陰性。
⑶ 新生黴素紙片（5.0μg/片）：抑菌圈≥16mm為敏感。質控菌株：表皮葡萄球菌陽性，腐生葡萄球菌陰性。
⑷ O129紙片、奧普托欣（Optochin）紙片：參見第五節《生化試驗培養基》。
二、診斷用血清
1.沙門菌屬診斷血清
⑴ A-F群O多價診斷血清。
⑵ 特異O群因子診斷血清：常用的有O2，O4，O7，O9，O10診斷血清。
⑶ 特異H因子診斷血清 常用的有Ha，Hb，Hc，Hd，Hgm，Hi，Hf、Vi因子診斷血清。
2.志賀菌屬診斷血清
志賀菌屬4種多價血清：痢疾志賀菌Ⅰ、Ⅱ血清，福氏志賀菌多價血清及分型血清（1～6型），宋內志賀菌診斷血清，鮑氏志賀菌多價血清及分型血清。
3.致病性大腸埃希菌診斷血清
腸致病性大腸埃希菌（EPEC）診斷血清，產腸毒素大腸埃希菌（ETEC）診斷血清，腸侵襲性大腸埃希菌（EIEC）診斷血清，腸出血性大腸埃希菌（EHEC）診斷血清O157： H 7。
4.霍亂弧菌O1、O139混合多價診斷血清及稻葉、小川、彥島O139分型血清
5.腦膜炎奈瑟菌多價血清及分群血清
6.鏈球菌分類診斷血清
7.肺炎鏈球菌診斷血清
8.耶爾森菌診斷血清
三、常用染色液
1.革蘭染色液
⑴ 結晶紫溶液 A液：結晶紫 20g，95%乙醇20 ml； B液：草酸銨 0.8g， 蒸餾水80 ml。
染色前24h將A液、 B液混合,過濾後裝入試劑瓶內備用。
⑵ 碘液:碘1g，碘化鉀2g，蒸餾水300ml。
將碘與碘化鉀混合並研磨,加入幾毫升蒸餾水, 使其逐漸溶解,然後研磨,繼續加入少量蒸餾水至碘、碘化鉀完全溶解。最後補足水量。也可用少量蒸餾水將碘化鉀完全溶解,再加入碘片,待完全溶解後,加水至300ml。
⑶ 脫色液：95%乙醇
⑷ 復染液：沙黃2.5g，95%乙醇100ml為貯存液，取貯存液10ml，加蒸餾水90ml為應用液。
2.抗酸染色液
⑴ 鹼性復紅染色液： ①萋納石炭酸復紅溶液：鹼性復紅乙醇飽和溶液10ml，5%石炭酸溶液90ml。 ②脫色液：濃鹽酸3ml，95%乙醇97ml。③復染液(呂弗勒美藍液)：美藍乙醇飽和溶液30ml，100g/L氫氧化鉀溶液0.1ml，蒸餾水100ml。
⑵ 金胺O-羅丹明B染色液： ①羅丹明B液：羅丹明B 0.1g加蒸餾水100ml。②1g/L金胺O液：金胺O液0.1g加蒸餾水95ml,再加入純石炭酸 5ml,混勻。③3%鹽酸乙醇。④稀釋美藍液：呂弗勒美藍液100ml,加蒸餾水90ml,混勻。
3.鞭毛染色液(改良Ryu法)
A液：5%石炭酸10ml，鞣酸2g，飽和硫酸鋁鉀溶液 10ml； B液：結晶紫乙醇飽和液。應用液A液10份,B液1份,混合,室溫存放備用。
4.異染顆粒染色液
甲液：甲苯胺藍 0.15g，孔雀綠 2g/L， 95% 乙醇2.0ml，蒸餾水100ml。乙液：碘 2g，碘化鉀3g，蒸餾水300ml。
先將碘化鉀加入少許蒸餾水(約2ml),充分振搖,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解後, 加蒸餾水至300ml。
5.莢膜染色液
⑴ 印度墨汁或50g/L黑色素水溶液
⑵ 5g/L苯胺藍水溶液。