㈠ 菌種轉種、傳代的要求和操作步驟是什麼
定期移植法，亦稱傳代培養保藏法，包括斜面培養、穿刺培養、液體培養等。是指將菌種接種於適宜的培養基中，最適條件下培養，待生長充分後，於4～6℃進行保存並間隔一定時間進行移植培養的菌種保藏方法。
操作步驟如下：
1 培養基制備
1.1 器皿准備
培養基制備過程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、試管、培養皿、燒杯、吸管等，經洗滌、乾燥、包裝、滅菌後使用。
1.2 溶解培養基配料
先在燒杯中放適量水，按培養基配方稱取各項材料，依次將緩沖化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解，最後加足水量，攪拌均勻。
1.3 調pH值
配料溶解後將培養基冷卻至室溫，根據要求加稀酸（0.1mol/L鹽酸）或稀鹼(10%氫氧化鈉)調pH值。加酸或鹼液時要緩慢、少量、多次攪拌，防止局部過鹼或過酸而導致測量不準確和營養成分被破壞。
1.4 加凝固劑
配製固體培養基時需加凝固劑，如瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養基中，加熱並不斷攪拌至融解，再補足所蒸發水分。
1.5 過濾分裝
在二層紗布中間夾入脫脂棉，將配好的培養基趁熱過濾並分裝。斜面培養基分裝量約為試管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培養基分裝量以試管高度的二分之一為宜。分裝過程中勿使培養基沾污管口，以免弄濕棉塞造成污染。
1.6 包紮標記
將試管加棉塞，外麵包紮一層牛皮紙或鋁箔並註明培養基名稱及配製日期。
1.7 滅菌
根據要求將培養基滅菌，通常蒸汽滅菌為121℃，15～20min。
1.8 斜面擺放
滅菌後及時擺放斜面，斜面長度不超過試管管長的二分之一為宜。
1.9 無菌檢查
將滅菌的培養基放入培養箱中作無菌檢驗，通常30℃培養1～3天。無菌檢查合格後將其保存於4℃下備用。
2 接種
2.1 斜面接種
2.1.1 點接
把菌種點接在斜面中部偏下方處。適用於擴散型生長及絨毛狀氣生菌絲類黴菌（如毛霉、根霉等）。
2.1.2 中央劃線
從斜面中央自下而上劃一直線。適用於細菌和酵母菌等。
2.1.3 稀波狀蜿蜒劃線法
從斜面底部自下而上劃「之」字形線。適用於易擴散的細菌，也適用於部分真菌。
2.1.4 密波狀蜿蜒劃線法
從斜面底部自下而上劃密「之」字形線。能充分利用斜面獲得大量菌體細胞，適用於細菌和酵母菌等。
㈡ 為什麼要將傳代培養放入二氧化碳中培養
CO2的作用是維持培養液中穩定的PH值，保證細胞正常生長分裂。
㈢ 菌種傳代什麼意思
就是把菌種轉移到新的培養基中，培養一段時間，直到其生長量滿足需要
㈣ 為什麼微生物發酵前或大量培養微生物前需要同步培養
微生物發酵前和或者是大量培養微生物錢，只需要同步培養的，這樣。做出來的東西才有比較有實驗性。
㈤ 人工培養微生物的意義
稀釋培養法和高通量培養法 d.pp3D 9/
在地球環境中，海洋環境中迄今可培養微生物的比例最低，僅為0.001% ～ 0.1%，這是由於海洋環境中主要是寡營養微生物，它們在人工培養時往往受到少數優勢生長的微生物的競爭作用而不能生長。為了克服該缺陷，1993 年Button從概率論的角度提出一個嶄新的方法，即稀釋培養法（Dilution culture）。該方法認為，當把海水中微生物群體稀釋至痕量時，在海水中主要存在的寡營養微生物可以不受少數幾種優勢微生物的競爭作用的干擾，因而主體寡營養微生物被培養的可能性會大大提高。隨後，Schut等的實際操作驗證了該理論的正確性。 ';/84j-3F
2002 年Connon在稀釋培養法的基礎上提出高通量培養法（High-throughput culturing，HTC）。將樣品稀釋至痕量後，採用小體積48 孔細胞培養板分離培養微生物。該方法不僅有效提高微生物的可培養性，還可在短期內監測大量的培養物，大大提高工作效率。Cho等利用該方法從太平洋近海和遠洋海水中也分離出多種新菌。Rappé 和Connon結合熒光原位雜交技術（FISH），對高通量培養法進行了改進，根據從培養板各孔中針對性地檢測SAR11 進化分支的海洋細菌的存在，在較短時間內對目標微生物進行了大量的培養。但是，稀釋培養法和高通量培養法成功的原因恰恰又是制約其進一步發展的障礙。在樣品稀釋、微生物間的不利作用被削弱的同時，有利作用也被削弱。例如，當微生物被極度稀釋、初始接種量很小時，一些微生物分泌的代謝產物也被稀釋，其他關聯微生物細胞由於缺乏這些必須的代謝產物，生長就會受到抑制；另外，缺少種間的共生關系和群體效應，很多微生物仍然不可培養。 O 3!d(dY=_
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3.2 擴散盒培養法 GOW"o"S
Kaeberlein〔2〕等在分離培養潮間帶底泥中的微生物時使用一種新穎的自製培養儀器，為其起名為擴散盒（Diffusiongrowth chamber）。擴散盒由一個環狀的不銹鋼墊圈和兩側膠連的0.1μm 濾膜組成，濾膜只能允許培養環境中的化學物質通過而不能讓細胞通過。將底泥樣品置於擴散盒內的半固體培養基中，擴散盒置於魚缸底部的天然海洋底泥上，往魚缸內加入天然海水並保證擴散盒內存有一定空氣供微生物生長。培養時，使天然海水循環流動，並不斷注入新鮮的海水。培養1 周後培養基上產生大量的微型菌落，數目高達接種微生物的40%。這種培養方法能較大程度地模擬微生物所處的自然環境，由於化學物質可以自由穿過薄膜，可保證微生物群落間作用的存在，提高微生物可培養性。擴散盒法的主要不足是操作比較繁瑣。 b%nkIP A
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3.3 細胞包囊法 hNO )~ rt
Zengler 等將海水和土壤樣品中的微生物先進行類似稀釋培養法的稀釋過程，然後乳化，部分微生物形成了僅含單個細胞的膠狀微滴。然後將膠狀微滴裝入層析柱內，使培養液連續通過層析柱進行流態培養。層析柱進口端用0.1μm 濾膜封住，防止細菌的進入而污染層析柱；出口端用8μm 濾膜封住，允許培養產生的細胞隨培養液流出。該方法的特點是讓微生物在開放式培養液中生長，使培養環境接近於微生物的自然生長環境，能夠很好地提高微生物可培養性，但成本較高，不利於普及使用。 & zgPN8u
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3.4 序列引導分離技術 _:5=| 2-E
序列引導分離技術（Sequence-guiding isolation）是根據微生物基因組中特定基因的特異性序列，設計引物或雜交探針，以培養物中目標序列存在和變化情況為標准，來指導對微生物最優培養條件的選擇，培養出新的微生物。Stevenson在細菌培養過程中採用了多種培養條件的組合，導致培養方案繁多復雜。為了減少分離細菌的工作量、節省時間，用PCR 作為監測手段來確定目標細菌是否得到培養。當細菌在固體培養基上長出菌落後，用緩沖液沖洗培養基表面，提取沖洗液中細菌的DNA，根據目標細菌的16S rDNA擴增情況判斷目標細菌的存在與否。繼續用PCR方法監測目標細菌直至分離得到純菌株。Béjà 等通過對尚未培養的海洋變形細菌的BAC 基因文庫進行研究，發現該類菌具有編碼視紫紅質的基因片段。視紫紅質是光營養過程中不可或缺的化學物質。據此設想增加光照可提高該菌的可培養性，而進一步的實驗結果驗證了該假設的正確性。此外，Breznak指出，分子原位雜交技術可以對推斷目標微生物的代謝方式和營養需求提供幫助，極大地節省工作時間，操作也很簡便，僅需要一種特異性的探針，顯示了在微生物培養時引入分子生物學技術作為引導的優勢和力量。
㈥ 培養微生物時,為什麼要在培養後再次培養
微生物連續培養法是相對於分批培養的方法。在分批培養中，培養基是一次性加入，不再補充，隨著微生物的生長繁殖活躍，營養物質逐漸消耗，有害代謝產物不斷積累，細菌的對數生長期不可能長時間維持。連續培養是在研究生長線的基礎上，認識到了穩定期到來的原因，採取在培養器中不斷補充新鮮營養物質，並攪拌均勻；另一方面，及時不斷地以同樣速度排出培養物(包括菌體和代謝產物)。這樣，培養物就達動態平衡，其中的微生物可長期保持在對數期的平衡生長狀態和穩定的生長速率上。此法是目前發酵工業的發展方向。
續培養的方法主要有恆濁連續培養和恆化連續培養兩類。1.恆濁連續培養用濁度計來檢測培養液中菌液濃度，使培養液中細菌的濃度恆定的培養方法稱為恆濁培養。所涉及的培養和控制裝置稱為恆濁器。當恆濁器中濁度超過預期值時，可促使培養液流速加快，使濁度下降；濁度計低於預期數值時，流速減慢，使濁度增加。這種方法可自動地進行控制，使培養物維持一定的濁度。濁度下降，表明體系中有豐富營養物質，濁度的改變是培養物中的菌體數量變化的標志。在恆濁器中通過控制培養液的流速，從而獲得密度高、生長速度恆定的微生物細胞的連續培養液。微生物在恆濁器中，始終能以最高生長速率進行生長，並可在允許范圍內控制不同的菌體密度。在生產實踐上，為了獲得大量菌體或與菌體生長相平行的某些代謝產物如乳酸、乙醇時，可以採用恆濁法。2.恆化連續培養控制恆定的流速，使培養器內營養物質的濃度基本恆定，使細菌生長所消耗的物質及時得到補充，從而維持細菌恆定的生長速率的一種連續培養方法稱為恆化培養。當營養物濃度偏高時。並不影響微生物的生長速度，而當營養物濃度較低時，則影響菌體生長速度，而且在一定范圍內，生長速率與營養物濃度成正比關系。營養物質濃度的確定往往是將培養基中的一種微生物生長所必需的營養物控制在較低的濃度下，作為限制生長的因子，其他營養物是過量的。通過控制生長困子的濃度，來保持菌體恆定的生長速率。常用的限制性生長因子一般是氮源、碳源、無機鹽或其他生長因子等。
連續培養如用於發酵工業中，就稱為連續發酵。連續發酵與分批發酵相比有許多優點：①高效 它簡化了裝料、滅菌、出料、清洗發酵罐等許多單元操作，從而減少了非生產時間和提高了設備的利用率；②自控 便於利用各種儀表進行自動控制；③產品的質量較穩定；④節約了大量動力、人力、水和蒸汽，且使水、氣、電的負荷均勻合理。連續培養或連續發酵也有一定的缺點。最主要的缺點是菌種易於退化，處於長期高速繁殖下的微生物，即使其自發突變率極低，也無法避免變異的發生，尤其易發生比原生產菌株生長速率更高、營養要求低和代謝產物少的負變類型；其次是易受雜菌污染，在長期運轉中，要保持各種設備無滲漏，尤其是通氣系統不出任何故障，是極其困難的。因此，連續培養是有時問限制的，一般可達數月至一兩年；此外，在連續培養中，營養物質的利用率一般也低於分批培養
㈦ 為什麼培養細胞長成緻密單層後必須要進行傳代培養
因為正常細胞具有接觸抑制現象，
如果不分瓶培養，
就會導致細胞停止分裂，
最終衰老死亡。
細胞膜上有糖類和蛋白質共同構成的糖蛋白，也叫做糖被，
它在細胞上起識別作用。
當細胞增殖到一定程度，
也就是互相挨在一起的時候，
糖蛋白識別了這種信息，
就會使細胞停止繼續繁殖。
請參看接觸抑制
http://ke..com/view/472342.htm
㈧ 3 微生物發酵生產的工廠，為什麼都要進行菌種的擴大培養，一般如何進行菌種的擴大培養
在微生物發酵生產時，為保證足夠的接種量，常採用菌種的擴大培養。
用以生產的菌株第一步要在實驗室環境下培養達700ml以上菌種時，接入一級種子罐種培養1-2天後，輸入二級種子罐培養1-2天，再輸入發酵罐中培養7天左右。
發酵時出現產量不穩定由多種因素引起，種子質量，接種量，原材料的質量，在發酵過程中糖、氮的補充，發酵控制條件不成熟等。
原材料的影響不大，除非是賣到發霉變質的，或者是質量嚴重不合格的原材料。
本人認為重要可能是發酵過程中糖氮的補充，掌握不成熟。易引起發酵產量不穩定。
㈨ 微生物的保藏技術各自特點
1.傳代培養保藏，方法簡便但是其缺點也很明顯菌種管棉塞經常容易發霉，菌株遺傳性狀易變異，需定期轉種，工作量大，且易被污染；2.冷凍保藏，適用抗凍能力強的微生物，注意保藏過程中菌種的退化。3.乾燥保藏，主要適用於能形成孢子或孢子囊的微生物菌種，其中有包括沙土管保存和冷凍真空保藏。前者簡單易行，適合實驗室以及放線菌為菌種的保存，後者適合絕大部分菌種的保藏包括噬菌體和立克次氏體等的保藏。望採納
㈩ 傳代培養
「傳代培養的代數不是細胞分裂的次數」當然了，你能知道細胞分裂了多少次？我們能看到的就是，他分裂啊分裂啊，最後鋪滿了整個瓶子，然後你換個大瓶子，這就是一次傳代了~據現在的教科書（新課改），原代培養僅僅指你在第一個瓶子中培養的那一次，以後的都叫傳代培養