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微生物活性怎麼測

發布時間:2022-07-03 06:58:43

微生物菌體濃度的測定方法有哪些

微生物菌體濃度的測定方法:

  1. 活菌計數法

    此法能准確地判斷菌液濃度,但有明顯的滯後性,無法在第一時間內2確定其實際濃度,待結果出來後,再開始檢測,菌的活性將有所下降,給實驗室操作帶來諸多不便;

  2. 比濁法

    此法能快速地判斷菌液濃度,但為粗略的估計值,受限於各人肉眼的觀察,誤差較大,准確性不高。


微生物菌體濃度的測定(纖維製品的抗菌性試驗方法為例)

一、菌種:

大腸桿菌(EscherichiacoliATCC8099)


二、試劑與儀器

蛋白腖

牛肉膏

氯化鈉

Cary100紫外——可見光分光光度計


三、培養基

營養細菌培養基NB。

蛋白腖5g,牛肉膏粉3g,蒸餾水1000mL,pH6.8±0.2。

營養瓊脂培養基NA。

蛋白腖5g,牛肉膏粉3g,瓊脂粉15g,蒸餾水1000mL,pH6.8±0.2。

1、對數生長期菌液的制備

取在規定保存代數之內的供試菌種,在火焰旁,挑取一鉑金環,在營養瓊脂培養基上劃線,於37℃±1℃培養24h後,在平板上挑取飽滿的單菌落,置於20mL營養細菌培養基中,振盪(110r/min,振幅3cm)培養24h。

2、穩定期菌液的制備

取培養好的對數生長期菌液0.4mL,於20mL營養細菌培養基中,再振盪培養4h,即為穩定期菌液。


四、吸光度(ABS值)的測定

取培養好的穩定期菌液,按不同的設定稀釋倍數(5、10、20、40倍),依次進行稀釋,(稀釋液為1/20NB),在660nm標准波長下,測得一組不同菌液濃度的吸光度。(用空白1/20NB進行測試前調零)。


五、活菌計數

在無菌室內火焰旁進行操作。分別依次測定四個不同稀釋倍數的菌落數。每個稀釋倍數依次制定幾個濃度梯度,用滅菌吸管各吸取1mL注入平皿。注入約15mL,45~50℃的營養瓊脂培養基,隨即轉動平皿,使樣品與培養基充分混合均勻,待培養基凝固後,翻轉平皿,置37℃±1℃培養箱內培養24h後,進行菌落計數。用肉眼觀察,點出菌落數,記下各平皿的菌落數後,

求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數。


六、標准曲線的製作

運用生物統計ORG數據分析軟體,以吸光度ABS值為橫坐標,穩定期的菌液濃度為縱坐標繪制標准曲線。

② 微生物試驗中,菌種的傳代實驗怎麼做微生物的酶活怎麼測

微生物傳代最常用的就是斜面接種法,大致意思就是你從原代菌種里挑一點劃線法保存到小試管里的斜面培養基上,進而讓菌種不斷增殖保存下來。 其方法步驟如下:首先,點燃酒精燈。將菌種和斜面培養基的兩只試管平行放在左手上,用拇指與其它四指夾住,並使中指位於兩試管之間,兩試管的管口齊平(圖9-5①)。其次,用右手先將棉塞擰轉松動,並稍拉出一些,以利又質卑緯觶ㄍ?9-5②)。第三,右手持接種針,在酒精燈將針頭部分燒紅滅菌(圖9-5③)。針頭以上凡是接種時可能進入試管的部分,均應用火灼燒。以下操作都要使試管口靠近火旁。第四,用右手的小指與掌間拔掉左手上兩只試管上的棉塞,同時迅速將試管口在酒精燈上燒灼3秒鍾左右,使管口上可能沾染的少量雜菌得以燒死。第五,將燒過的接種針伸入菌種管內,先將針頭接觸培養基上沒有菌的部位(如斜面的頂端),使其冷卻,以免燙死被接種的菌體。然後輕輕接觸菌體,取出少許,慢慢將接種針抽出試管,接種針抽出時不要使針頭部分碰到管壁和管口,取出後,不可使針頭通過火焰,更不可觸及其它無關物品或桌面。第六,迅速將接種針伸進另一試管,在培養基上輕輕劃線,接種菌體於其上。劃線時,要由底部起劃較密的平行線,一直劃到頂部,以充分利用斜面面積,但不要將培養基劃破。第七,燒灼試管口,將棉塞塞上。塞棉塞時,不要移動試管迎接棉塞,以免試管在移動中納入可能含菌的空氣。第八,將針頭在火焰上燒灼滅菌。放回原處後,騰出手將棉塞塞緊。二、關於微生物酶活性測定,比較復雜,網上比較多,不同酶測定方法也不一樣,同學你自己慢慢查吧,O(∩_∩)O哈哈~

③ 請教各位那些技術可以測定微生物活性

土壤微生物活性表示土壤中整個微生物群落或其中的一些特殊種群狀態,可以反映自然或農田生態系統的微小變化。土壤微生物活性的表徵量有:微生物量、C/N、土壤呼吸強度和纖維呼吸強度、微生物區系、磷酸酶活性、酶活性等。
土壤呼吸強度和纖維分解強度是土壤微生物活性的重要標志,反映了土壤中微生物活性及對有機質殘體分解的速度和強度。纖維素分解強度採用埋片法;呼吸強度採用鹼吸收滴定法。土壤微生物活性用土壤呼吸CO2測定法(5g鮮土於310mL試劑瓶中,22℃24h測CO2釋放量(用exH23os紅外CO:分析儀測定))。直接測定土壤呼吸的方法基本可分為靜態氣室法、動態氣室法和微氣象法三種。
土壤酶大多數來自土壤微生物,在土壤中已發現50—60種酶,它們參與並催化土壤中發生的一系列復雜的生物化學反應。如水解酶和轉化酶對土壤有機質的形成和養分循環具有重要的作用。已有研究表明,土壤酶活性和土壤結構參數有很好的相關性。土壤微生物酶主要有脫氫酶、磷酸酶、精氨酸酶及芳基硫酸酯酶等。

④ 微生物測定法的方法分類

液體稀釋法
在一組試管中分別加入一定的培養基,然後加入不等量的被測物質,再將已培養好的、用於測定的微生物接種進去,在規定的條件下培養一定時間,觀察其消長情況並與標准曲線對比,計算出被測物質的含量。
固體平板擴散法
將溶化的固體培養基與被測定微生物混合做成平板,把含不等量被測物質的液體滴入置於平板上(直接滴樣法);或注入平板上的牛津杯內(管碟法);或吸入圓形濾紙片後,再置於平板上(紙片法);也可以在平板上挖一定大小的圓孔,然後把被測物滴入孔內(打孔法);經培養後在物質擴散所及的范圍內出現抑菌法(或生長圈),測量圈的直徑,並與標准曲線對比,計算出被測物質的含量(見圖[固體平板擴散法 1、3、7 打孔法2、8紙片法4、6管碟法5直接滴樣法][])。
1932年,A.弗萊明在研究溶菌酶和青黴素時,開始使用微生物法測定抗生素的活性。1940年,E.B.錢恩等根據平板上抑菌圈的大小測定青黴素的活性含量。後又經E.P.亞伯拉罕等進一步將上述測定方法予以完善。測定抗生素時常用的微生物有大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、啤酒酵母、黑麴黴等。1935年,W.H.肖普費最先用微生物測定維生素B。1939年,E.E.斯內爾和F.M.斯特朗用乳桿菌測定維生素的含量。1934年,K.A.凱肯等用阿拉伯聚糖乳桿菌測定9種氨基酸。此後,乳桿菌屬、鏈球菌屬、明串珠菌屬的成員及某些微生物的變異株,逐漸成為最常使用的對象。

⑤ 微生物的傳統檢測方法有哪些

傳統檢測有三種方法

1、直接顯微鏡觀察,正常情況,在一定的培養條件下(相同的培養基、溫度以及培養時間),同種微生物表現出穩定的菌落特徵。可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。

2、選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件,選擇培養基,其作用是允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷,得到的微生物往往並不只有一種,但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。

3、鑒別培養基,根據微生物的代謝特點,在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。與選擇培養相比,鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小,一般可直接測定某微生物的種類。

⑥ 檢測微生物有哪幾種方法

1.觀察法:用顯微鏡尋找,醫院常用。
2.分析儀法:已經有專用的分析儀。
3.失氧法:將檢測物質密閉,檢測其中氣體成分的變化(氧氣、氮氣、二氧化碳等)。

⑦ 怎樣判斷超聲後的污泥中微生物是否還有活性謝謝!

簡易方法:

  1. 取少量淤泥,加入無菌水攪拌均勻;

  2. 待澄清後取上清液,滴於培養基上接種,細菌、真菌、放線菌等培養基不同哦;

  3. 將培養基放於恆溫箱中培養後觀察菌斑生長,即初步可判定其活性。

⑧ 微生物檢測有哪些

1、體積測量法:又稱測菌絲濃度法。原理:通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。

菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放,簡便,快速,但需要設定一致的處理條件,否則偏差很大,由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物,結果會有一定偏差。

2、稱乾重法。原理:利用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10-20%。稱乾重發法較為煩瑣,通常獲取的微生物產品為菌體時,常採用這種方法,如活性乾酵母(activity dry yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。

3、比濁法。原理:微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值,判斷微生物的生長狀況。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。

4、菌絲長度測量法。方法:對於絲狀真菌和一些放線菌,可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度。

⑨ 生物中檢測微生物用什麼意思方法

生長量測定法

體積測量法:又稱測菌絲濃度法。
通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是,取一定量的待測培養液(如10毫升)放在有刻度的離心管中,設定一定的離心時間(如5分鍾)和轉速(如5000 rpm),離心後,倒出上清夜,測出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放,簡便,快速,但需要設定一致的處理條件,否則偏差很大,由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物,結果會有一定偏差。

稱乾重法:
可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10-20%。在離心法中,將一定體積待測培養液倒入離心管中,設定一定的離心時間和轉速,進行離心,並用清水離心洗滌1-5次,進行乾燥。乾燥可用烘箱在1050C或1000C下烘乾,或採用紅外線烘乾,也可在800C或400C下真空乾燥,乾燥後稱重。如用過濾法,絲狀真菌可用濾紙過濾,細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾,過濾後用少量水洗滌,在400C下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣,通常獲取的微生物產品為菌體時,常採用這種方法,如活性乾酵母(activity dry yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。

比濁法:
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值,判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時,可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中,即可隨時測定其生長情況,而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計,在波長600nm 處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600,以此監控E.Coli的生長及誘導時間。

菌絲長度測量法:
對於絲狀真菌和一些放線菌,可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度,或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管,到入合適的培養基,卧放,在開口的一端接種微生物,一段時間後記錄其菌絲生長長度,藉此衡量絲狀微生物的生長。

微生物計數法

血球計數板法:
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片,玻片上有四條溝和兩條嵴,中央有一短橫溝和兩個平台,兩嵴的表比兩平台的表面高0.1 mm,每個平台上刻有不同規格的格網,中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察,統計一定大格內微生物的數量,即可算出1毫升菌液中所含的菌體數。這種方法簡便,直觀,快捷,但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數,並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。

染色計數法:
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數,而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足,人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色,可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液,染色後在顯微鏡下觀察,活細胞為無色,而死細胞為藍色。

比例計數法:
將已知顆粒(如黴菌孢子或紅細胞)濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合,在顯微鏡視野中數出各自的數目,即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。

液體稀釋法:
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋,根據估計數,從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣,接種1毫升到3組共15隻裝培養液的試管中,經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數,然後查最大或然數表MPN(most probably number)得出菌樣的含菌數,根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測,例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。

平板菌落計數法:
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋,取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合,或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後,用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度,即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9cm的平板上出現50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩,操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數,而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養,獲得了單克隆。

試劑紙法:
在平板計數法的基礎上,發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片,瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基,其中加入活性指示劑2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC,無色)待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確,相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。

膜過濾法:
用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品,經丫叮橙染色,在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光,活細胞會發橙色熒光,而死細胞則發綠色熒光。

生理指標法:
微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化,例如酸鹼度,發酵液中的含氮量,含糖量,產氣量等,與生長量相平行的生理指標很多,它們可作為生長測定的相對值。

測定含氮量:
大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%,酵母為7.5%,黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25,即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多,如用硫酸,過氯酸,碘酸,磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合,在CO2氣流中加熱後產生氮氣,收集在呼吸計中,用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。

測定含碳量:
將少量(乾重0.2-2.0 mg)生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中,用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5毫升,在580nm的波長下讀取吸光光度值,即可推算出生長量。需用試劑做空白對照,用標准樣品做標准曲線。

還原糖測定法:
還原糖通常是指單糖或寡糖,可以被微生物直接利用,通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況,常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是,離心發酵液,取上清液,加入斐林試劑,沸水浴煮沸3分鍾,取出加少許鹽酸酸化,加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液,繼續加Na2S2O3至終點,查表讀出還原糖的含量。

氨基氮的測定:
方法是,離心發酵液,取上清液,加入甲基紅和鹽酸作指示劑,加入0.02N的NaOH調色至顏色剛剛褪去,加入底物18%的中性甲醛,反應數刻,加入0.02N的使之變色,根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量,可間接反映微生物的生長狀況。

其他生理物質的測定:
P,DNA,RNA,ATP,NAM(乙醯胞壁酸)等含量以及產酸,產氣,產CO2(用標記葡萄糖做基質),耗氧,黏度,產熱等指標, 都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化,最終產氣量,微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如我所在BMP-2的發酵生產上,隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化,判斷細菌的長勢。

商業化快速微生物檢測法:
微生物的檢測,其發展方向是快速,准確,簡便,自動化,當前很多生物製品公司利用傳統微生物檢測原理,結合不同的檢測方法,設計了形式各異的微生物檢測儀器設備,正逐步廣泛應用於醫學微生物檢測和科學研究領域。例如:
1、抗干擾培養基和微生物數量快速檢測技術結合解決了傳統微生物檢測手段不能解決的難題,為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統奠定了堅實的基礎。中科院廣州分院合作產業處提供的抗干擾微生物培養基,新型生化鑒定管,微生物計數卡,環境質量檢測試劑盒等,可方便的用於多項檢測。
2、BACTOMETER 全自動各類總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時內獲得監測結果,樣本顏色及光學特徵都不影響讀數,對酵母和黴菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法(IMPEDANCE TECHNOLOGY)將待測樣本與培養基置於反應試劑盒內,底部有一對不銹鋼電極,測定因微生物生長而產生阻抗改變。如微生物生長時可將培養基中的大分子營養物經代謝轉變為活躍小分子,電阻抗法可測試這種微弱變化,從而比傳統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數,酵母菌,大腸桿菌群,黴菌,乳酸菌,嗜熱菌,革蘭氏陰性菌,金黃色葡萄球菌等。

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