如何从土壤中分离和纯化微生物

⑴ 如何从复杂的土壤样本中分离我们所需要的目标微生物

如何从复杂的土壤样本中分离我们所需要的目标微生物？
有机肥之中有机质的分解转化是一个复杂的过程，微生物活动在分解转化过程之中起着重要作用。土壤环境非常适合微生物活动，所以土壤之中天然微生物数量最多。因为土壤之中微生物种类繁多，数量大；一克土壤之中，微生物有几十种到几百种，几亿到几十亿个，土壤微生物繁殖迅速，在有机质的转化和分解之中起着重要作用。土壤微生物包括细菌、放线菌、真菌和藻类。

（1）细菌



细菌是一种单细胞微生物，是土壤之中分布最广、数量最多的微生物。细菌有三种基本形态：球形、杆状和螺旋形；有球菌、杆菌和螺旋体（40种）；包括号菌&41；三种类型。土壤细菌按其营养类型可分为自养菌、兼性自养菌和异养菌。

（2） 真菌



土壤真菌分布广泛，适应广泛的酸性条件，在PH4.0条件之下生长良好，对森林土壤有机质的转化起着重要作用。土壤真菌是异养的。它们必须从土壤有机质之中获取能量和碳源，并在发育过程之中需要良好的供氧。根据真菌与树木的关系及其营养类型，真菌可分为腐生真菌、寄生真菌和共生真菌。

（3） 放线菌



放线菌是细长的菌丝体，呈分枝状或放射状。它们在土壤之中仅次于细菌。大多数是腐生植物。许多放线菌能分解纤维素、淀粉、脂肪、木质素和蛋白质。

⑵ 土壤微生物分离与纯化实验原理和方法

一、实验目的
了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理
测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫· 霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图 21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1 /4000mm3。

⑶ 请问：怎样分离提纯微生物

1. 稀释涂布平板法
(1) 倒平板 将肉膏蛋白胨琼脂培养基， 高氏Ⅰ号琼脂培养基；马丁氏琼脂培养基加热溶化，待冷至55~60℃， 高氏Ⅰ号琼脂培养基加入10%酚数滴，马丁氏琼脂培养基加入链霉素溶液。混匀后分别倒平板，每种培养基倒三皿；
(2) 制备土壤稀释溶液 称取土样10g，放入盛有90ml无菌水并带入玻璃珠的三角烧瓶，振动约20min，使土样与水分混合，将细胞分散.用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此推制成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6不同稀释的土壤溶液；
(3) 涂布 将上述每种培养基的三个平板地面分别用记号笔写上10-4，10-5，10-6三种稀释度，然后用无菌吸管分别由10-4，10-5，10-6三管土壤稀释液中各取0.1ml对号放入已写好室温下静置5~10min，使菌液吸附进培养基；
(4) 培养 将高氏Ⅰ号琼脂培养基平板;马丁氏琼脂培养基平板倒置于28℃温室中培养3~5day，肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2~3day；
(5) 挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基的斜面上，分别置28℃和37℃温室培养，大菌苔长出后，检查其特征是否一致，同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是为单一的微生物。若发现有杂菌，需要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。
2.平板划线分离法
(1)倒平板 按稀释涂布平板倒平板，并用记号标明培养基名称，土样编号和实验日期；
(2) 划线 在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述的土壤悬液一环在平板上划线.划线的方法很多，但无论采用那种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落；
(3) 挑菌落 同稀释涂布平板法，一直到分离的微生物认为纯化为止。

⑷ 土壤中微生物怎样分离纯化培养

1、土样采集：取10cm左右深层土壤10g备用。 
2、制备土壤稀释液：称取土壤1g，放入有99mL无菌水的三角瓶中，振荡均匀，即为稀释10－2的土壤悬液。然后进行十倍梯度稀释，依次制备 10－3、10－4、10－5
、10－6 、10－7 稀释度的土壤稀释液。                                                  3、培养基平板制备：按培养基配方各配置牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马丁氏培养基、高氏Ⅰ号培养基各100ml。灭菌后分别倒3个平板。（高氏Ⅰ号培养基灭菌前加入10滴10%苯酚；马丁氏培养基倒平板前加入2ml去氧胆酸钠(2%)和0.4ml 1万单位/ml链霉素） 
4、接种：用无菌吸管吸取0.1ml相应浓度土壤稀释液，以无菌操作技术接种在平板上，涂布均匀。细菌选用10－4、10－5、10－6 三个稀释度接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，放线菌与霉菌选用10－2  、10－3、10－4 三个稀释度，分别接种于高氏Ⅰ号培养基、马丁氏培养基。（一个稀释度一个平板） 
5、培养：细菌平板于37℃恒温培养1～2d，放线菌于30℃培养2～3d，霉菌于30℃培养3～5d ，观察。 
6、计数：用稀释水样检测平板的菌落计数方法进行计数，报告细菌总数/(CFU·ml-1) 
7、纯化：挑取典型菌落接种于相应平板，培养条件同上，培养纯化。

⑸ 如何从土壤中分离产纤维素酶的微生物

在培养基上只添加纤维素和其他一些必需物质如无机盐，水，生长因子可以生活，或者说可以形成菌落的就只有可以产生纤维素酶的微生物了，因为只有它才可以把纤维素水解为葡萄糖并加以利用。

能够分解纤维素的微生物很多。既有好氧性微生物，也有厌氧性微生物；既有细菌，也有放线菌和真菌。 好氧性纤维素分解细菌:食纤维菌属和生孢食纤维菌属是土壤中常见的好氧性纤维素分解细菌。多囊菌属、镰状纤维菌属与纤维弧菌属。 许多放线菌能够分解纤维素。

(5)如何从土壤中分离和纯化微生物扩展阅读：

水可使纤维素发生有限溶胀，某些酸、碱和盐的水溶液可渗入纤维结晶区，产生无限溶胀，使纤维素溶解。纤维素加热到约150℃时不发生显着变化 ，超过这温度会由于脱水而逐渐焦化。纤维素与较浓的无机酸起水解作用生成葡萄糖等，与较浓的苛性碱溶液作用生成碱纤维素，与强氧化剂作用生成氧化纤维素。

将选好的工业木浆板疏解，送入已加1%～10%的盐酸(用量为5%～10%)的反应釜进行升温水解，温度为90～100℃，水解时间0.5～2h，反应结束后经冷却送人中和槽，用液碱调至中性，过滤后滤饼在80～100℃下干燥，最后经粉碎得产品。

⑹ 土壤微生物的分离方法

取土壤配好适当浓度的溶液，然后稀释成十的负七次方或者六次方这样。
用微生物接种的方法在酒精灯边上稀释液拿微滴管取500微升置入固体培养基，然后加入玻璃小球摇晃，这是为了让稀释液均匀分布。然后37度培养一天到两天就行了，不能太久不然会长杂菌。
就是这样吧，抱歉细节没有写，太长了。注意过程无菌

⑺ 如何送土壤中分离和培养一株微生物并获得纯培养

纯种分离技术是微生物学中重要的基本技术之一.分离是指从混杂的微生物群体中获得单一菌株纯培养的方法.纯种（纯培养）是指一株菌种或一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代. 微生物的分离与纯化技术的应用：分离具有特殊功能的微生物、优良菌种及纯化被污染的菌种等.

⑻ 将土壤中的微生物（细菌，真菌，放线菌）进行分离，纯化，培养保藏的具体步骤及注意事项

1.用三种培养基培养，分别是牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养、分离）、马铃薯葡萄糖培养基（真菌培养），高氏1号培养基（放线菌）
2.培养一定时间，待菌长出，根据三种菌的菌落特点，选取菌种，用划线法接种到各种菌对应的斜面培养基上，培养。
3.进行生化实验，确定是否是你猜想的菌。三种菌的生化实验具体我也不是很清楚。
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⑼ 土壤微生物的分离方法（注：此类微生物不能纯化分离）

一般分类细菌用10-7-8次浓度的土壤悬液细菌、10-5-6次放线菌、10-3-4次分离的是真菌。
微生物(microorganism），包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物等在内的一大类生物群体，个体微小，与人类生活密切相关。广泛涉及健康、医药、工农业、环保等诸多领域。在中国大陆地区的教科书中，均将微生物划分为以下8大类：细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体。