生物材料在培养液里面浮起来怎么办

A. 细胞培养时培养液出现浑浊这是什么原因

培养基变浑浊的原因可能有如下几点：
1、细胞存在污染，污染早期可以见到细胞生长；
2、不排除传代时细胞密度过大，或者操作不当导致多数细胞不贴壁，大量细胞漂浮。
3、细胞破碎。

细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染.他们在细胞培养中污染的特点如下：
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显.
2、支原体：黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一.而且它不能用过滤的办法除去.支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去.
3、黑胶虫：可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的.常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象.对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理.
4、真菌：一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物.真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了.
5、原虫：培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮.他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养.这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环.
6.病毒：组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染.目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒.尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的.因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题 。
7、非同种细胞污染 ：即是细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染.目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效.非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致.

B. 植物细胞的液体悬浮培养中出现白色的球状物，请问是

实验原理:
植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养，在培养过程中能够保持良好的分散状态。植物离体培养可产生愈伤组织。将疏松型的愈伤组织县浮在液体培养基中并在振荡条件下培养一段时间后，可形成分散县浮培养物。良好的县浮培养物应具备以下特征：（1）主要有单细胞和小细胞团组成；（2）细胞具有量盛的生长和分裂能力，增殖速度快；（3）大多数细胞在形态上应具有分生细胞的特征，它们多呈等径形，核一质比率大，胞质浓厚，无液胞化程度较低。
在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养，因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说，细胞在培养到第18～25d 时达到最大的密度，此时应进行第一次继代培养。在继代培养时，应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系，就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作，特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株，即可获得携带有目标基因的个体。
主要试剂:
B5培养基加上0.2mg NAA（naphthalene acetic acid）的液体培养基（取3.2g B5粉末培养基，蔗糖30g，200ul体积质量为1mg/ml的NAA贮备液，溶于约800ml蒸馏水中，置于磁力搅拌器上混合均匀，pH计测定pH 值，1mol/l KOH调节pH值至5.8，加蒸馏水定容至1L，铝箔纸封口后121℃灭菌20min，贮于4℃冰箱，接种前水浴或自然升至室温）。
主要设备:
1. 超净工作台
2. 高压灭菌锅
3. 旋转式摇床
4. 水浴锅
5. 倒置显微镜
6. 镊子
7. 酒精灯
8. 三角瓶
9. 移液器
10. pH计
11. 恒温培养室
12. 漏斗
13. 不锈钢筛
14. 血球计数板等
实验材料:
拟南芥愈伤组织
实验步骤:
1. 用镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织，放入三角瓶中并轻轻夹碎。每100ml三角瓶含灭过菌的培养基 10~15ml，每瓶接种1~1.5g愈伤组织，以保证最初培养物中有足够量的细胞。
2. 将已接种的三角置于旋转式摇床上。在100r/min，25~28℃条件下，进行振荡培养。
3. 经6~10天培养后，若细胞明显增殖，可向培养瓶中加新鲜培养基10ml，必要时，可用大口移液管将培养物分装成两瓶，继续培养。（若细胞无明显增殖，可能是起始材料不适当，应考虑用旺盛增殖期的愈伤组织重新接种）。可进行第一次继代培养。
4. 悬浮培养物的过滤：按“3”法继代培养几代后，培养液中应主要由单细胞和小细胞团（不多于20个细胞）组成。若仍含有效大的细胞团，可用适当孔径的金属网筛过滤，再将过滤后的县浮细胞继续培养。
5. 细胞计算。取一定体积的细胞县液，加入2倍体积的8%的三氧化铬（CrO3），置70℃水浴处理15min。冷却后，用移液管重复吹打细胞悬液，以使细胞充分分散，混匀后，取一滴县液置入血细胞计数板上计数。
6. 制作细胞生长曲线：为了解县浮培养细胞的生长动态，可用以下方法绘制生长曲线图：
1) 鲜重法（fresh weigh method）在转代培养的不同时间，取一定体积的悬浮培养物，离心收集后，称量细胞的鲜重，以鲜重为纵座标，培养时间为横座标，绘制鲜重增长曲线。
2) 干重法（dry weigh method ）可在称量鲜重之后，将细胞进行曲烘干，再称量干重。以干重为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制细胞干重生长曲线。
上述两种方法均需每隔2天取样一次，共取7次，每个样品重复三次，整个实验进行期间不再往培养瓶中换入新鲜培养液。
7. 细胞活力的检查。对于初学者，往往需要检测活细胞的比率。可在培养的不同阶段，吸取一滴细胞县液，放在载玻片上，滴一滴0。1%的酚藏花红溶液（用培养基配制）染色，在显微镜下观察。几活细胞均不着色，而死细胞则很快被染成红色。也可用0。1%荧光双醋酸酯溶液染色，凡活细胞将在紫外光诱发下显示蓝绝色荧光，有经验的操作者，则可根据细胞形态，胞质环流判别细胞的死活。
8. 细胞再生能力的鉴定：为了解悬浮培养细胞是否仍具有再生能力，可将培养细胞转移到琼脂固化的培养基上，使基再形成愈伤组织，进而在分化培养基上，诱导植株的分化。
注意事项:
1. 上述步骤均灭菌操作，培养基、用具、器皿等要高压灭菌后方可使用。
2. 如培养液混浊或呈现乳白色，表明已污染。
3. 每次继代培养时，应在倒置显微镜下观察培养物中各类细胞及其它残余物的情况以有意识地留下圆细胞，弃去长细胞。

C. 肉汤琼脂培养基灭菌后有絮状沉淀怎么办

肉汤琼脂培养基灭菌后有絮状沉淀怎么办
灭菌时的过高温度常对培养基造成不良影响。如：
1.出现混浊和沉淀(天然培养基成分加热沉淀出大分子多肽聚合物；培养基中Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Sb等阳性离子与培养基中的可溶性磷酸盐共热沉淀)。
2.营养成份破坏或改变(酸度较高时淀粉、庶糖、乳糖或琼脂灭菌过程易水解;pH7.5,0.1MPa灭菌20min，葡萄糖破坏20%，麦芽糖破坏50%，若培养基中有磷酸盐共存，葡萄糖转变成酮糖类物质，培养液由淡黄色变成红褐色，破坏更为严重。
3.pH7.2时培养基中的葡萄糖、蛋白胨、磷酸盐在0.1MPa灭菌15min以上可产生对微生物生长的某种抑制物。
4.高压蒸汽灭菌后培养基pH下降0.1--0.3。
5.高压蒸汽灭菌的过程会增加冷凝水，降低培养基成份浓度。对于前三种不良影响，可采用低压灭菌(如在0.056MPa、30min灭菌葡萄糖溶液)，或将培养基几种成份分别灭菌，临 用前无菌混合(如磷酸盐与Ca、Mg、Fe、Zn、Cu等阳性离子溶液)的方法，特殊情况可采用间歇灭菌、过滤除菌(如维生素溶液)。工业发酵中采用的连续加压灭菌法(135--140摄氏度，5--15s)和连续蒸煮法。

D. 细胞培养霉菌污染怎么办

1 霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见，较易倍发现，短期内培养液多不浑浊，倒置显微镜下可见细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝，并悬浮漂荡在培养液中。很多菌丝在高倍镜下可见到有链状排列的菌株；念珠菌或酵母菌形态呈卵形，散在细胞周边和细胞之间生长。有时通过显微镜观察可能发现瓶底外面生长的菌丝，不要错当培养瓶内的污染。瓶外的污染物，需及时用乙醇棉球擦洗清除，以防其通过瓶口传入瓶内。
2 培养细胞的污染一旦明确，多数将无法救治。如果污染的细胞不是具有重要价值，一般发现污染后应尽快弃之，以防污染扩大影响其他细胞。
3 如为霉菌污染可以考虑采用制霉菌素25ug/ml或酮康唑10ug/ml对细胞进行处理。

E. 在恒温培养箱中打翻了一个培养基,培养液跑出来一些,但液体只在金属板上，没有掉到下层水槽中，怎么办

培养基被打翻了，这种情况建议清洁一下。
使用结束关闭电源，清洁摇床。为了安全，在取出样品时，一定要关闭电源；

操作进行中海生物培养基培养的时候也要遵循正确的培养箱使用方法
1. 操作人员需仔细阅读使用说明，了解、熟悉培养箱功能后，才能接通电源。
2. 接通电源，按下电源开关，此时电源指示灯亮。
3. 把温度控制仪调到用户所需的设定温度值。
4. 当培养箱显示温度达到设定温度时，加热中断、加热指示灯熄灭，在标准环境温度下通电90分钟后，温度可保持稳定，如箱内即时温度超过设定上限报警温度，控温仪温度跟踪报警指示灯亮，同时自动切断加热器电源。
5. 如打开玻璃门取样品时，加热器、循环风机会停止工作，当关上玻璃门后，加热器和风机才能正常运转，这样可避免培养物的污染及温度的过冲现象。

注意事项
1. 我国市电为交流220V、50Hz，使用前注意培养箱标识的电源电压是否与此相符，并进行有效接地，以保证使用安全。
2. 培养箱无防爆装置，不得放入易燃易爆物品。
3. 物品放置切勿过挤、过重，四周必须留出空间，以利热空气循环，防止隔板损坏。
4. 水套式培养箱保持箱内水位在合适范围。
5. 在使用中，切忌用手触碰风扇或用水冲洗。
6. 当使用高温时，应注意烫伤。
7. 非必要时，不得打开温度控制系统。

维护及保养
1. 保持培养箱表面整洁、美观。
2. 培养箱应放置在具有良好通风条件的室内，其周围不可放置易燃易爆物品。
3. 箱内物品放置切勿过挤，必须留有空间。
4. 箱内外应保持清洁，每次使用完毕应当进行清洁，长期不用应盖好防尘罩，放在干燥室内。
5. 设备管理人员根据检定计划进行计量检定，并定期对温度控制情况进行检查。
6. 夏季环境温度较高时，当设定温度低于40℃时，应采用“空调”降低环境温度（25-28℃，夜间必须保持此温度），以避免引起温度失控。
7. 培养箱不可放置在高温或潮湿的地方，避免阳光直射。
8. 培养箱内的风扇定期加注润滑膏脂。
9. 长期不用，应将水套内的水放掉，在电镀件上涂抹中性油脂或凡士林，以防腐蚀，培养箱外面套好塑料防尘罩，将培养箱放在干燥的室内，以免温度控制器受潮损坏

F. 高二生物。 植物细悬浮培养的原理是什么定义是什么和植物组织...

目的要求是了解植物细胞悬浮培养的基本原理，通过实验掌握植物细胞悬浮培养的方法和技术。并通过实验练习和巩固无菌操作技术。
基本原理：
利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点，比如在培养过程中，植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布，而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物产生影响，从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变而利用液体培养基则可以克服这一缺点，当植物的组织在液体培养基中生长时，我们可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养，在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。
一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡，一般可用100～12Or/min 的速度进行。由于液体培养基的旋转和震荡，使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。在液体培养基中的培养物是混杂的，既有游离的单个细胞，也有较大的细胞团块，还有接种物的死细胞残渣。
在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养，因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说，细胞在培养到第18～25d 时达到最大的密度，此时应进行第一次继代培养。在继代培养时，应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系，就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作，特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株，即可获得携带有目标基因的个体。

G. 细胞培养漂浮的碎屑是污染还是其他原因

细胞培养漂浮的碎屑是污染还是其他原因
细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性，多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。

H. 悬浮细胞在培养过程中，总觉得培养液比较脏，细胞形态也不一样。 可能是死细胞的原因，怎么净化悬浮细胞

一般培养的悬浮细胞的确容易出现这个情况。我养过的悬浮细胞种类不多，就个人经验而言。
1.从复苏细胞开始，要了解细胞的生长周期，尤其是出现指数生长期的时间段。尽量将细胞控制在一个合理的培养阶段，不要贪图省力贸然将细胞培养密度调小，或者认为过一个周末多个半天不处理也没有关系；除非你已经做过生长周期的确认；
2.有些悬浮细胞在平面培养环境中，会贴服在培养表面，虽然不会像贴壁细胞一样，但也不容易飘起来，但是在不断传代中会出现贴壁越来越差的情况，这个时候需要小心控制，仅保留贴壁的细胞传代，这样细胞就可以弃上清处理，死细胞或者分化的细胞就可以去掉
3.控制传代次数，复苏与冻存的记录要清楚，否则细胞状态很不稳定。
4.分化过程中如果出现过多的变异细胞，尤其是演变成完全贴壁的细胞（出现类伪足），建议不要用了，重新复苏。
一般这样处理的细胞的培养液还是比较干净的。个人实验经验，仅供参考。

I. 红茶菌在溶液中是不是浮上来了,就表示死了 它死了的话会有哪些现象 该如如何辨别红茶菌是否存活

红茶菌在溶液中浮上来不是死了，死了的红茶菌会沉底，变小，菌膜会出现变黄，变黑或变绿的情况。正常存活的红茶菌应该是菌液表面结成乳白色新鲜菌膜，培养液即发酵成甜酸的红茶菌液。

为了避免红茶菌发生变质坏死的情况，在培养时需要注意以下几点：

1、作好消毒工作。

2、要选择新鲜的菌液及菌膜。

3、应选用没有处理过的天然绿茶，红茶等茶叶。糖选用白砂糖，少使用蜂蜜，蜂蜜不纯，杂质多。水选择洁净的井水，泉水，有消毒剂的自来水禁用。

4、糖，茶，水的投放量。培养液第一次做要少放，第二次有经验可以加倍。

5、静置，通风，避阳光直射。

(9)生物材料在培养液里面浮起来怎么办扩展阅读

红茶菌的食用注意事项：

1、过敏反应：尤其是患有酸过敏的人，饮用红茶菌可能会感觉不舒服，因为红茶菌含有有机酸。

2、细胞因子的活性过度活跃刺激自身免疫系统造成一些反应。

3、自身的一些疾病或者肾脏与膀胱功能相对较弱造成的。如果本身肾脏功能不强或者毒素太多，然后喝的剂量太多，会导致肾脏超负荷工作。

4、有些初饮者服用红茶菌后会有的副作用，如兴奋、失眠、胃酸、轻度腹泻、皮肤发痒等。

J. 细胞传代后不贴壁了，成团浮在培养基里，怎么办

看下培养液颜色，是不是要更换培养液了，做下活性检测，看是不是有污染，细胞是不是死了。细胞和人一样，环境不舒服的时候就会表现出来的，养细胞是个细心活，慢慢来