㈠ 菌种转种、传代的要求和操作步骤是什么
定期移植法，亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。
操作步骤如下：
1 培养基制备
1.1 器皿准备
培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。
1.2 溶解培养基配料
先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。
1.3 调pH值
配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。
1.4 加凝固剂
配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。
1.5 过滤分装
在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。
1.6 包扎标记
将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。
1.7 灭菌
根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。
1.8 斜面摆放
灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。
1.9 无菌检查
将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。
2 接种
2.1 斜面接种
2.1.1 点接
把菌种点接在斜面中部偏下方处。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛霉、根霉等）。
2.1.2 中央划线
从斜面中央自下而上划一直线。适用于细菌和酵母菌等。
2.1.3 稀波状蜿蜒划线法
从斜面底部自下而上划“之”字形线。适用于易扩散的细菌，也适用于部分真菌。
2.1.4 密波状蜿蜒划线法
从斜面底部自下而上划密“之”字形线。能充分利用斜面获得大量菌体细胞，适用于细菌和酵母菌等。
㈡ 为什么要将传代培养放入二氧化碳中培养
CO2的作用是维持培养液中稳定的PH值，保证细胞正常生长分裂。
㈢ 菌种传代什么意思
就是把菌种转移到新的培养基中，培养一段时间，直到其生长量满足需要
㈣ 为什么微生物发酵前或大量培养微生物前需要同步培养
微生物发酵前和或者是大量培养微生物钱，只需要同步培养的，这样。做出来的东西才有比较有实验性。
㈤ 人工培养微生物的意义
稀释培养法和高通量培养法 d.pp3D 9/
在地球环境中，海洋环境中迄今可培养微生物的比例最低，仅为0.001% ～ 0.1%，这是由于海洋环境中主要是寡营养微生物，它们在人工培养时往往受到少数优势生长的微生物的竞争作用而不能生长。为了克服该缺陷，1993 年Button从概率论的角度提出一个崭新的方法，即稀释培养法（Dilution culture）。该方法认为，当把海水中微生物群体稀释至痕量时，在海水中主要存在的寡营养微生物可以不受少数几种优势微生物的竞争作用的干扰，因而主体寡营养微生物被培养的可能性会大大提高。随后，Schut等的实际操作验证了该理论的正确性。 ';/84j-3F
2002 年Connon在稀释培养法的基础上提出高通量培养法（High-throughput culturing，HTC）。将样品稀释至痕量后，采用小体积48 孔细胞培养板分离培养微生物。该方法不仅有效提高微生物的可培养性，还可在短期内监测大量的培养物，大大提高工作效率。Cho等利用该方法从太平洋近海和远洋海水中也分离出多种新菌。Rappé 和Connon结合荧光原位杂交技术（FISH），对高通量培养法进行了改进，根据从培养板各孔中针对性地检测SAR11 进化分支的海洋细菌的存在，在较短时间内对目标微生物进行了大量的培养。但是，稀释培养法和高通量培养法成功的原因恰恰又是制约其进一步发展的障碍。在样品稀释、微生物间的不利作用被削弱的同时，有利作用也被削弱。例如，当微生物被极度稀释、初始接种量很小时，一些微生物分泌的代谢产物也被稀释，其他关联微生物细胞由于缺乏这些必须的代谢产物，生长就会受到抑制；另外，缺少种间的共生关系和群体效应，很多微生物仍然不可培养。 O 3!d(dY=_
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3.2 扩散盒培养法 GOW"o"S
Kaeberlein〔2〕等在分离培养潮间带底泥中的微生物时使用一种新颖的自制培养仪器，为其起名为扩散盒（Diffusiongrowth chamber）。扩散盒由一个环状的不锈钢垫圈和两侧胶连的0.1μm 滤膜组成，滤膜只能允许培养环境中的化学物质通过而不能让细胞通过。将底泥样品置于扩散盒内的半固体培养基中，扩散盒置于鱼缸底部的天然海洋底泥上，往鱼缸内加入天然海水并保证扩散盒内存有一定空气供微生物生长。培养时，使天然海水循环流动，并不断注入新鲜的海水。培养1 周后培养基上产生大量的微型菌落，数目高达接种微生物的40%。这种培养方法能较大程度地模拟微生物所处的自然环境，由于化学物质可以自由穿过薄膜，可保证微生物群落间作用的存在，提高微生物可培养性。扩散盒法的主要不足是操作比较繁琐。 b%nkIP A
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3.3 细胞包囊法 hNO )~ rt
Zengler 等将海水和土壤样品中的微生物先进行类似稀释培养法的稀释过程，然后乳化，部分微生物形成了仅含单个细胞的胶状微滴。然后将胶状微滴装入层析柱内，使培养液连续通过层析柱进行流态培养。层析柱进口端用0.1μm 滤膜封住，防止细菌的进入而污染层析柱；出口端用8μm 滤膜封住，允许培养产生的细胞随培养液流出。该方法的特点是让微生物在开放式培养液中生长，使培养环境接近于微生物的自然生长环境，能够很好地提高微生物可培养性，但成本较高，不利于普及使用。 & zgPN8u
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3.4 序列引导分离技术 _:5=| 2-E
序列引导分离技术（Sequence-guiding isolation）是根据微生物基因组中特定基因的特异性序列，设计引物或杂交探针，以培养物中目标序列存在和变化情况为标准，来指导对微生物最优培养条件的选择，培养出新的微生物。Stevenson在细菌培养过程中采用了多种培养条件的组合，导致培养方案繁多复杂。为了减少分离细菌的工作量、节省时间，用PCR 作为监测手段来确定目标细菌是否得到培养。当细菌在固体培养基上长出菌落后，用缓冲液冲洗培养基表面，提取冲洗液中细菌的DNA，根据目标细菌的16S rDNA扩增情况判断目标细菌的存在与否。继续用PCR方法监测目标细菌直至分离得到纯菌株。Béjà 等通过对尚未培养的海洋变形细菌的BAC 基因文库进行研究，发现该类菌具有编码视紫红质的基因片段。视紫红质是光营养过程中不可或缺的化学物质。据此设想增加光照可提高该菌的可培养性，而进一步的实验结果验证了该假设的正确性。此外，Breznak指出，分子原位杂交技术可以对推断目标微生物的代谢方式和营养需求提供帮助，极大地节省工作时间，操作也很简便，仅需要一种特异性的探针，显示了在微生物培养时引入分子生物学技术作为引导的优势和力量。
㈥ 培养微生物时,为什么要在培养后再次培养
微生物连续培养法是相对于分批培养的方法。在分批培养中，培养基是一次性加入，不再补充，随着微生物的生长繁殖活跃，营养物质逐渐消耗，有害代谢产物不断积累，细菌的对数生长期不可能长时间维持。连续培养是在研究生长线的基础上，认识到了稳定期到来的原因，采取在培养器中不断补充新鲜营养物质，并搅拌均匀；另一方面，及时不断地以同样速度排出培养物(包括菌体和代谢产物)。这样，培养物就达动态平衡，其中的微生物可长期保持在对数期的平衡生长状态和稳定的生长速率上。此法是目前发酵工业的发展方向。
续培养的方法主要有恒浊连续培养和恒化连续培养两类。1.恒浊连续培养用浊度计来检测培养液中菌液浓度，使培养液中细菌的浓度恒定的培养方法称为恒浊培养。所涉及的培养和控制装置称为恒浊器。当恒浊器中浊度超过预期值时，可促使培养液流速加快，使浊度下降；浊度计低于预期数值时，流速减慢，使浊度增加。这种方法可自动地进行控制，使培养物维持一定的浊度。浊度下降，表明体系中有丰富营养物质，浊度的改变是培养物中的菌体数量变化的标志。在恒浊器中通过控制培养液的流速，从而获得密度高、生长速度恒定的微生物细胞的连续培养液。微生物在恒浊器中，始终能以最高生长速率进行生长，并可在允许范围内控制不同的菌体密度。在生产实践上，为了获得大量菌体或与菌体生长相平行的某些代谢产物如乳酸、乙醇时，可以采用恒浊法。2.恒化连续培养控制恒定的流速，使培养器内营养物质的浓度基本恒定，使细菌生长所消耗的物质及时得到补充，从而维持细菌恒定的生长速率的一种连续培养方法称为恒化培养。当营养物浓度偏高时。并不影响微生物的生长速度，而当营养物浓度较低时，则影响菌体生长速度，而且在一定范围内，生长速率与营养物浓度成正比关系。营养物质浓度的确定往往是将培养基中的一种微生物生长所必需的营养物控制在较低的浓度下，作为限制生长的因子，其他营养物是过量的。通过控制生长困子的浓度，来保持菌体恒定的生长速率。常用的限制性生长因子一般是氮源、碳源、无机盐或其他生长因子等。
连续培养如用于发酵工业中，就称为连续发酵。连续发酵与分批发酵相比有许多优点：①高效 它简化了装料、灭菌、出料、清洗发酵罐等许多单元操作，从而减少了非生产时间和提高了设备的利用率；②自控 便于利用各种仪表进行自动控制；③产品的质量较稳定；④节约了大量动力、人力、水和蒸汽，且使水、气、电的负荷均匀合理。连续培养或连续发酵也有一定的缺点。最主要的缺点是菌种易于退化，处于长期高速繁殖下的微生物，即使其自发突变率极低，也无法避免变异的发生，尤其易发生比原生产菌株生长速率更高、营养要求低和代谢产物少的负变类型；其次是易受杂菌污染，在长期运转中，要保持各种设备无渗漏，尤其是通气系统不出任何故障，是极其困难的。因此，连续培养是有时问限制的，一般可达数月至一两年；此外，在连续培养中，营养物质的利用率一般也低于分批培养
㈦ 为什么培养细胞长成致密单层后必须要进行传代培养
因为正常细胞具有接触抑制现象，
如果不分瓶培养，
就会导致细胞停止分裂，
最终衰老死亡。
细胞膜上有糖类和蛋白质共同构成的糖蛋白，也叫做糖被，
它在细胞上起识别作用。
当细胞增殖到一定程度，
也就是互相挨在一起的时候，
糖蛋白识别了这种信息，
就会使细胞停止继续繁殖。
请参看接触抑制
http://ke..com/view/472342.htm
㈧ 3 微生物发酵生产的工厂，为什么都要进行菌种的扩大培养，一般如何进行菌种的扩大培养
在微生物发酵生产时，为保证足够的接种量，常采用菌种的扩大培养。
用以生产的菌株第一步要在实验室环境下培养达700ml以上菌种时，接入一级种子罐种培养1-2天后，输入二级种子罐培养1-2天，再输入发酵罐中培养7天左右。
发酵时出现产量不稳定由多种因素引起，种子质量，接种量，原材料的质量，在发酵过程中糖、氮的补充，发酵控制条件不成熟等。
原材料的影响不大，除非是卖到发霉变质的，或者是质量严重不合格的原材料。
本人认为重要可能是发酵过程中糖氮的补充，掌握不成熟。易引起发酵产量不稳定。
㈨ 微生物的保藏技术各自特点
1.传代培养保藏，方法简便但是其缺点也很明显菌种管棉塞经常容易发霉，菌株遗传性状易变异，需定期转种，工作量大，且易被污染；2.冷冻保藏，适用抗冻能力强的微生物，注意保藏过程中菌种的退化。3.干燥保藏，主要适用于能形成孢子或孢子囊的微生物菌种，其中有包括沙土管保存和冷冻真空保藏。前者简单易行，适合实验室以及放线菌为菌种的保存，后者适合绝大部分菌种的保藏包括噬菌体和立克次氏体等的保藏。望采纳
㈩ 传代培养
“传代培养的代数不是细胞分裂的次数”当然了，你能知道细胞分裂了多少次？我们能看到的就是，他分裂啊分裂啊，最后铺满了整个瓶子，然后你换个大瓶子，这就是一次传代了~据现在的教科书（新课改），原代培养仅仅指你在第一个瓶子中培养的那一次，以后的都叫传代培养